色谱分析法重点.ppt

组分在色谱分离过程中的分布 第五节 色谱定性和定量分析 一 、色谱的定性分析 色谱定性分析就是要确定各色谱峰所代表的化合物。由于各种物质在一定的色谱条件下均有确定的保留值，因此保留值可作为一种定性指标。目前各种色谱定性方法都是基于保留值的。 但是不同物质在同一色谱条件下，可能具有相似或相同的保留值，即保留值并非专属的。因此仅根据保留值对一个完全未知的样品定性是困难的。如果在了解样品的来源、性质、分析目的的基础上，对样品组成作初步的判断，再结合下列的方法则可确定色谱峰所代表的化合物。 在一定的色谱条件下，一个未知物只有一个确定的保留时间。因此将已知纯物质在相同的色谱条件下的保留时间与未知物的保留时间进行比较，就可以定性鉴定未知物。若二者相同，则未知物可能是已知的纯物质；不同，则未知物就不是该纯物质。 纯物质对照法定性只适用于组分性质已有所了解，组成比较简单，且有纯物质的未知物。 相对保留值αis 是指组分i与基准物质s调整保留值的比值： αis = tRi ? / tRS′= VRi? / VRs? 它仅随固定液及柱温变化而变化，与其它操作条件无关。 当未知样品中组分较多，所得色谱峰过密，用上述方法不易辨认时，或仅作未知样品指定项目分析时均可用此法。 首先作出未知样品的色谱图，然后在未知样品加入某已知物，又得到一个色谱图。峰高增加的组分即可能为这种已知物。 保留指数表示物质在固定液上的保留行为，是目前GC中使用最广泛并被国际上公认的定性指标。它具有重现性好、标准统一及温度系数小等优点。 保留指数仅与固定相的性质、柱温有关，与其它实验条件无关。其准确度和重现性都很好。只要柱温与固定相相同，就可应用文献值进行鉴定，而不必用纯物质相对照。 色谱定量的依据： 定量分析的任务是求出混合样品中各组分的百分含量。色谱定量的依据是：当操作条件一致时，被测组分的质量（或浓度）与检测器给出的响应信号成正比。即： mi = fi ? Ai 式中mi为被测组分i的质量； Ai为被测组分i的峰面积； fi为被测组分i的校正因子。 可见，进行色谱定量分析时需要： （1）准确测量检测器的响应信号— 峰面积或峰高； （2）准确求得比例常数 — 校正因子； （3）正确选择合适的定量计算方法，将测得的峰面积或峰高换算为组分的百分含量。 引入定量校正因子的原因： 　 我们知道，被测组分的量与它在色谱图上的峰面积或峰高成正比。但是，相同量的两种不同组分在同一检测器(例如紫外检测器)中的响应值并不相同，也就是两者的峰面积或峰高不相同。所以，两者的峰面积或峰高之比并不等于两者的含量之比。因此，需要引入定量校正因子，使峰面积或峰高经过校正后，与其代表物质的量相适应。 定量校正因子的定义：进入检测器的组分的量(mi )与其色谱峰面积(Ai)或峰高(h)之比为一比例常数 fi ，该比例常数 fi就称为该组分的绝对校正因子。 相对校正因子的定义： fi? = fi / fs 即某组分i的相对校正因子fi?为组分i与标准物质s的绝对校正因子之比。 获得相对校正因子的方法：相对校正因子值只与被测物和标准物以及检测器的类型有关，而与操作条件无关。因此， fi? 值可自文献中查出引用。若文献中查不到所需的fi? 值，也可以自己测定。测定方法：一定量的待测物＋选定的基准物→制成一定浓度的混合溶液进样，测得两组分色谱峰面积Ai和As，由公式求得。 1、面积归一化法 把所有出峰组分的含量之和按100%计的定量方法称为归一化法。其计算公式如下： 面积归一化法，前提是试样中所有组分都产生信号并能检出色谱峰；依据是组分含量与峰面积成正比。优点：简便，准确，色谱条件变化对定量结果影响不大。缺点：所有组分必须在一定时间内都出峰，且必须已知所有组分的校正因子，此外，测量低含量尤其是微量杂质时，误差较大。 2、外标法 以待测组分纯品为对照物，与试样中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法。 特点：①不需要校正因子，不需要所有组分出峰；②结果受进样量、进样重复性和操作条件影响大。 外标法可分为：外标工作曲线法、外标一点法、外标二点法。 3、内标法 所谓内标法，是将一定量的纯物质作为内标物加入到待测物的标准溶液和样品溶液中，再进行分析测定的方法。 内标法的关键是选择合适的内标物，它必须符合下列条件：①内标物应是试样中