利用SRAP与ISSR标记分析川党参的遗传多样性.pdfVIP

第 34 卷第 3 期 Vol.34 ，Issue 3 2009 年 2 月 February ，2009 ·研究论文· 利用 SRAP 和 ISSR 标记分析川党参的 遗传多样性 1* 1 1 1 1 2 陈大霞 ，彭 锐 ，李隆云 ，孙年喜 ，钟国跃 ，蔡应繁 （1. 重庆市中药研究院，重庆 400065 ；2. 重庆邮电大学，重庆 400065 ） [摘要] 目的：川党参 Codonopsis tangshen 的遗传多样性研究。方法：对 18 个不同来源地的川党参种质进行 SRAP （sequence-related amplified polymorphism ），ISSR （inter simple sequence repeat ）分析。利用TREECONW 软件分析遗传相 似系数，UPGMA 方法构建亲缘关系系统图。结果：29 条 SRAP 引物组合共得到 329 条扩增条带，其中有 266 条呈现多态 性，占80.85%，平均遗传相似系数为 0.712 1 。21 条 ISSR 引物共得到 223 条扩增条带，其中有 166 条呈现多态性，占74.44%， 平均遗传相似系数为 0.778 1 。2 种标记均表明川党参具有较高的遗传多样性。聚类结果显示川党参种质亲缘关系与地理分布 相关性不显著。2 种标记系统得到了相似但并不完全相同的聚类图，2 种标记方法间存在显著相关性(r=0.802 ，P ＜0.01)。结 论：川党参种质的遗传多样性水平较高。SRAP 与 ISSR 标记均适用于川党参种质的遗传多样性分析。 [关键词] 川党参；SRAP；ISSR ；遗传多样性 随着分子生物学的迅猛发展，将分子标记技术 分子标记技术对川党参种质资源遗传多样性方面 运用于物种的遗传多样性研究已日益受到育种学 的研究尚未见报道。本研究利用 SRAP 和 ISSR 技 家的青睐。在众多的分子标记中，简单重复序列区 术研究川党参种质的遗传多样性，为川党参品种鉴 间(inter simple sequence repeat，ISSR)和相关序列扩 定、优良种质资源筛选提供方法和理论依据。 增多态性(sequence-related amplified polymorphism， 1 材料和方法 SRAP)标记针对基因组中的特殊序列设计引物，同 1.1 供试种子 川党参采自重庆、陕西、湖北、贵 时使用较高的退火温度和较长的引物，不仅重复性 州等地，共 18 份材料见表 1，由重庆市中药研究 高、稳定性好，且具有无需预知受试基因组 DNA 院副研究员彭锐鉴定。选取植株上的成熟种子，脱 序列、多态性和信息量丰富等特点，已广泛应用于 粒去杂，置于放有滤纸的培养皿上 25 ℃萌发，发 药用植物种质资源遗传多样性方面的研究。 芽 3～5 cm 高时取幼苗，置于-40 ℃冰箱保存备用。 川党参 Codonopsis tangshen 属桔梗科植物，味 1.2 仪器 HH-S 型水浴锅（河南省巩义市英峪予 甘、性平，入脾、肺二经，具有补中益气，生津和 华仪器厂），TGL-16G 台式离心机（上海菲恰尔分 胃之功效，为《中国药典》2005 年版收载品种。目 析仪器有限公司），Gel Doc 2000 凝胶成像系统 前对党参分子生物学方面的报道较少，仅见于将分 （BIO-RAD ），Eppendorf Mastercycle