人金属硫蛋白基因(MT1E)在毕赤酵母中的表达及其铬抗性.pdfVIP

第 ３４ 卷第 １０ 期 环　 境　 科　 学　 学　 报 Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１０ ２０１４年１０月 　Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ Ｏｃｔ．，２０１４ ＤＯＩ：１０．１３６７１／ｊ．ｈｊｋｘｘｂ．２０１４．０７１６ 许黎明，蒋国凤，周兴．２０１４．人金属硫蛋白基因（ＭＴ１Ｅ）在毕赤酵母中的表达及其铬抗性［Ｊ］．环境科学学报，３４（１０）：２７２４⁃２７３０ Ｘｕ Ｌ Ｍ，Ｊｉａｎｇ Ｇ Ｆ，Ｚｈｏｕ Ｘ． ２０１４．ＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＰｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ ｏｖｅｒ⁃ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ ｇｅｎｅ （ＭＴ１Ｅ） ｏｎ ｈｅａｖｙ ｍｅｔａｌ ｃｈｒｏｍｉｕｍ ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］． Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ，３４（１０）：２７２４⁃２７３０ 人金属硫蛋白基因（ＭＴ１Ｅ）在毕赤酵母中的表达及其 铬抗性 １ ２，３ １，∗ 许黎明 ，蒋国凤 ，周兴 １． 广西科学院生物研究所，南宁５３０００３ ２． 广西大学林学院，南宁５３０００４ ３． 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁５３０００４ 收稿日期：２０１３⁃１１⁃１５　 　 　 修回日期：２０１４⁃０４⁃２０　 　 　 录用日期：２０１４⁃０５⁃０１ 摘要：金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）是一类富含半胱氨酸的蛋白质，巯基含量丰富，其半胱氨酸上的巯基对重金属离子有极强的结合力，能 够结合重金属形成无毒或低毒的络合物，具有重金属解毒的功能．本文根据已公布的人金属硫蛋白基因ＭＴ１Ｅ序列，用Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ７．０软件设计 合成 １２条寡聚核苷酸片段，并拼接得到ＭＴ１Ｅ完整基因．将测序正确的ＭＴ１Ｅ基因克隆至酵母表达载体 ｐＰＩＣ９Ｋ，酶切验证后的阳性克隆命名 为ｐＰＩＣ９Ｋ⁃ＭＴ１Ｅ，含有该重组基因的毕赤酵母工程菌命名为ＧＳ１１５／ ｐＰＩＣ９Ｋ⁃ＭＴ１Ｅ．通过酶联免疫 （Ｅｎｚｙｍｅ⁃ＬｉｎｋｅｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙ，ＥＬＩＳＡ） 方法检测到ＧＳ１１５／ ｐＰＩＣ９Ｋ⁃ＭＴ１Ｅ工程菌发酵液有金属硫蛋白酶活性，表明人金属硫蛋白ＭＴ１Ｅ基因能在毕赤酵母 ＧＳ１１５菌株中正确分泌表 达．铜（Ｃｕ）、锌（Ｚｎ）、锰（Ｍｎ）、铬（Ｃｒ）、钴（Ｃｏ）重金属抗性分析表明，工程菌 ＧＳ１１５／ ｐＰＩＣ９Ｋ⁃ＭＴ１Ｅ 对 Ｃｒ（Ⅵ）的抗性较强，有解毒重金属 Ｃｒ（Ⅵ）的能力． 关键词：人金属硫蛋白ＭＴ⁃１Ｅ；毕赤酵母；ＥＬＩＳＡ；重金属抗性 文章编号：０２５３⁃２４６８（２０１４）１０⁃２７２４⁃０７　 　 　 中图分类号：Ｘ１７１．５　 　 　 文献标识码：Ａ ＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＰｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ ｏｖｅｒ⁃ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｈｕｍａｎ ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ ｇｅｎｅ （ＭＴ１Ｅ） ｏｎ ｈｅａｖｙ ｍｅｔａｌ ｃｈｒｏｍｉｕｍ ｓｔｒｅｓｓ １ ２，３ １，∗ ＸＵ Ｌｉｍｉｎｇ ，ＪＩＡＮＧ Ｇｕｏｆｅｎｇ ，ＺＨＯＵ Ｘｉｎｇ １． Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００３ ２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｇｕａｎｇｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００４ ３． Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌ Ａｇｒｏ⁃ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００４ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ １５ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１３；　 　 　 ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎ ｒｅｖｉｓｅｄ ｆｏｒｍ２０ Ａｐｒｉｌ ２０１４；　 　 　 ａｃｃｅｐｔｅｄ １Ｍａｙ ２０１４ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ （ＭＴ）ｉｓａｋｉｎｄｏｆｈｅａｖｙｍｅｔａｌｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｗｈｉｃｈｉｓｒｉｃｈｉｎｃｙｓｔｅｉｎｅａｎｄｓｕｌｆｙｄｒｙｌ．Ｔｈｅｓｕｌｆｙｄｒｙ