羊胎盘免疫活性小分子肽的分离纯化.pdfVIP

摘要 羊胎盘免疫活性小分子肽的分离纯化 细胞生物学专业硕士研究生任兴宏 指导教师方廖琼副教授 摘要 胎盘是哺乳类胎生动物在妊娠时为胎儿供应养分，供胚胎生长的特殊器官。 其组织细胞内含有丰富的类固醇激素，肽类激素，前列腺素，生长因子，细胞因 子等胎儿生长所需的物质成分。自从1943年日本京都医院山岛教授从羊胎盘中成 功地提取出羊胎素后，对羊胎盘提取液的研究引起了广大学者的浓厚兴趣。近年 来研究发现，羊胎盘提取液中富含包括小分子肽类的多种生物活性物质。但是对 羊胎盘提取液中功能组分的纯化、功能组分的组成研究的相关报道甚少。本研究 采用组织匀浆、反复冻融、冷冻离心、超滤的方法制备羊胎盘提取液；采用加脲 羊胎盘提取液肽组分，并采用E．玫瑰花环试验检测各肽组分的免疫活性；用Edman 降解法测活性组分N末端氨基酸序列。其目的是通过超滤和反相高效液相色谱将结 合的方法分离纯化出有免疫活性的胎盘肽，并对所纯化的羊胎盘肽的免疫活性进 行分析和氨基酸序列鉴定，为进一步阐明其生物活性的作用机理和免疫活性小分 子肽的进一步研发提供必要的依据。 本实验的研究内容如下：l、采用组织匀浆、反复冻融和超滤相结合的方法制 备羊胎盘提取液。2、对所制备的羊胎盘提取液进行理化性质鉴定，并采用 制备的羊胎盘提取液逐一纯化得到纯度比较高的单一组分，并采用E．玫瑰花环实 验对各个纯化物进行免疫活性检测。4、对免疫活性高且纯度较高的组分，采用 Edman降解法测定N端氨基酸序列。 实验结果：1、羊胎盘提取液均为无色或微黄色的透明液体，冷冻干燥后呈疏 松多孔的海绵状白色粉末，其PH为6．40±0．02，蛋白质定性反应检测中颜色均 变成紫红色，沉淀反应中蛋白质反应呈阴性，电泳结果显示羊胎盘提取液中含有 两南大学硕十学何论文 花环实验对3个纯度较高组分的活性测定表明峰1．5、峰2．3有免疫活性。Edman 工具进行短序列匹配的蛋白质数据库检索，发现没有与此多肽同源的序列，为一 新的多肽。该多肽的免疫功能稳定性及其作用机制尚需要进一步的研究。 结论： 羊胎盘提取液。 组分，其肽纯度分别为90．6％、91．4％、99．6％。E一玫瑰花环试验检测发现峰1-5、 峰2-3组分具有增强脱受体的淋巴细胞恢复其表面受体的功能，促进人外周血T淋 巴细胞E玫瑰花环形成，并具有剂量效应依赖关系，表明两个纯化组分具有T细胞 免疫活性。 一个新的多肽。 关键词：羊胎盘小分子肽E一玫瑰花环纯化 Abstract m 曼鼍鼍皇i n ．W!u鼍皇舅舅曼曼曼鼍皇皇曼曼鲁量曼皇曼曼曼舅曼曼皇蔓量量皇曼曼 一一M of PlacentaSmallmolecule The andPurification separation goat with ImmunityActivity Peptide Ren Cell masterXinghong Biology Liaoqiong Supervisor：Prof．Fang Abstract formammalian animals The thenutrients viviparousduring placenta,providing