Cry1Ie蛋白的模拟胃肠液消化稳定性及其热稳定性分析.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 11 :214-221 Cry1Ie 蛋白的模拟胃肠液消化稳定性及热稳定性分析 1，2 2 1 2 李欣竹   耿丽丽  高继国  张杰  （1. 东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030 ；2. 中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193） 摘 要 ： Cry1Ie 蛋白对亚洲玉米螟 （ ）具有高毒力， 基因已经应用于转基因抗虫玉米的种质创制。为 Ostrinia furnacalis cry1Ie 评价Cry1Ie 蛋白的食用安全性，开展了Cry1Ie 蛋白的消化及热稳定性研究。利用实验室已经构建的表达载体，在大肠杆菌中表达 了分子量为81 kD 的可溶性Cry1Ie 蛋白，经过Ni-NTA 亲和层析和Superdex-75 分子筛层析获得纯度达91％蛋白。模拟消化液实验 结果表明，Cry1Ie 蛋白在模拟胃肠液中15 s 内即被消化，SDS未检测到蛋白残留。热稳定性实验中，Cry1Ie 蛋白在玉米粉提 取液中不稳定，100℃ 30 min 内蛋白基本降解。对样品进行了生物活性测定发现，经模拟胃肠液消化处理和热处理后的Cry1Ie 蛋 白对亚洲玉米螟无杀虫活性。Cry1Ie 蛋白在胃肠液系统中和热处理条件下均不稳定，并丧失了对亚洲玉米螟的杀虫活性。 关键词 ： 转基因玉米 ；Cry1Ie 蛋白 ；消化稳定性；热稳定性 ；杀虫活性 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.11.028 Analysis of Digestive Stability in Simulative Digestive Tract Fluid and Heat Stability of Cry1Ie Protein 1，2 2 1 2 Li Xinzhu Geng Lili Gao Jiguo Zhang Jie （1. Northeast Agricultural University College of Life Science ，Harbin 150030 ；2. The National Key Laboratory of Plant Diseases and Insect Pests ，Beijing 100193 ） Abstract: Due to the high virulence to Asian corn borer（Ostrinia furnacalis ）of Cry1Ie, this protein had applied into the germplasm creating of transgenic insect-resistant maize. To evaluate the food safety of Cry1Ie protein, this study carried out the digestion and heat stability assays. Using the expressing vector which the