大肠杆菌表达托佩克猪SLA-1胞外区研析.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 3 :135-139 大肠杆菌表达托佩克猪 SLA-1 胞外区的研究 翟晓鑫  张秀娟  杨杰  高凤山 （大连大学生命科学与技术学院，大连 116622） 摘 要 ： 为构建托佩克猪SLA-1 重链基因原核重组表达载体并研究其在pET-21a（+） 中的表达，设计引物，PCR 扩增托 佩克猪SLA-1 基因胞外区 （命名为SLA-1-TPKe）， 并克隆至pMD19-T Simple Vector， 经酶切鉴定后将SLA-1-TPKe 基因与表达系 统pET-21a（+）连接，转化到BL21（Rosseta）菌进行诱导表达，SDS检测目的蛋白。提取SLA-1-TPKe 包涵体，并经SDS- PAGE 检测。PCR 结果显示，SLA-1-TPKe 大小为851 bp，成功克隆到pMD19-T Simple Vector， 酶切鉴定大小为831 bp，连接到 pET-21a（+）并转化到BL21（Rosseta）菌，经诱导表达和SDS检测目的蛋白的大小为31 kD。 目的蛋白以包涵体形式存在， 纯化后蛋白纯度达到90% 以上。 关键词 ： 托佩克猪 ；SLA-1 ；重链基因 ；表达 ；包涵体 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.04.019 - Expression of the Extracellular Domain of SLA 1 Derived from Topigs Pig in Escheichia coli Zhai Xiaoxin Zhang Xiujuan Yang Jie Gao Fengshan （College of Life Science and Technology ，Dalian University ，Dalian 116622 ） Abstract: In order to construct the recombinant prokaryotic expressed vector of the heavy chain of SLA-1 derived from Topigs pig and to study its expression in pET-21a（+）, a pair of primers was designed to amplify the extracellular domain of SLA-1-TPK gene（named SLA- 1-TPKe）followed by sub-cloning the gene into pMD19-T Simple Vector. After identification by cleavage with Nde I and Xho I, the SLA-1-TPKe was ligated to pET-21a（+）and transformed into BL21（Rosseta）to be induced to express followed by analysis of the expressing products by SDS. Finally, the inclusion bodies of the SLA-I-TPKe was isolated and detected by SDS. The PCR result w