甘菊cDNA-AFLP反应体系的优化.pdfVIP

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2016-05-12 发布于安徽
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甘菊cDNA-AFLP反应体系的优化.pdf

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生物技术通报 ·研究报告 · B IO TECHN OLO G Y　BULL E T IN 2009年第 11期甘菊 cD NA AFL P反应体系的优化 1 1, 2 1 1 黄河　王顺利　曹华雯　戴思兰 ( 1 2 ) 北京林业大学园林学院 ,北京 100083; 北京农学院城乡发展学院 ,北京 102206 　　摘　要 : 　以甘菊为试验材料 ,研究了影响 cDNA A FL P反应体系的几个关键因素 ,建立了适宜甘菊的 cDNA A FL P分析体系 ,并得到了清晰可辨的 cDNA A FL P指纹图谱。结果表明:适用于甘菊叶片总 RNA 提取的方法为改进的 Trizo l法 ;酶切连接采用一步法 , d scDNA 酶切用量为 300 ng,酶切连接时间为 8 h; PCR 选择性扩增反应时 ,反应体系中最佳组合为 : 引物浓度 04 2 + mM 、M g 浓度 125 mM 、Taq酶浓度 09 U 、dN TP浓度 03 mM 。关键词 : 　甘菊　cDNA A FL P　反应体系优化 O ptim iza tion of cD NA AFL P Techn ica l System for Ch rysan th em um lavandu lifolium 1 1, 2 1 1 Huang He 　W ang Shun li 　Cao Huawen 　D ai Silan 1 ( Colleg e of L andscap e A rch itectu re, B eij ing F orestry Un iversity, B eij ing 100083; 2 Colleg e of U rban and R u ra l D evelopm en t, B eij ing A g ricu ltu ra l College, B eij ing 102206) 　　Ab s tra c t: 　A fter system atical studies on the factors affecting cDNA A FL P analysis system of Ch ry san them um lavandu lif olium , an op tim ized system wa s e stab lished wh ich showed a distinct electrop horetogram of cDNA A FL P. The resu lts indicated that u sing the im p roved Trizo l m ethod can iso late RNA qu ick ly and efficiently from Ch ry san