黑曲霉β-甘露聚糖酶基因manA在PK15细胞中的分泌表达.pdfVIP

生物技术通报 · · BIOTECHNOLOGY B ULLETIN 20 11 8 研究报告 年第 期 - manA 黑曲霉 β 甘露聚糖酶基因 在 PK15 细胞中的分泌表达 1 1 ，2 1 1 1 1 2 1 邹娴 张茂 许惠 林纯 贺晓燕 刘德武 蔡更元 吴珍芳 1 2 ( ， 510642 ; ， 510600) 华南农业大学动物科学学院 广州 广东省农业科学院畜牧研究所 广州 : RT-PCR ， RNA - manA 。 摘 要 通过 方法 从黑曲霉总 中克隆出β 甘露聚糖酶基因 的成熟肽编码序列 将其与猪腮腺分 (parotid secretory protein ，PSP) PCR ， pcD- 泌蛋白 基因的信号肽序列通过重叠延伸 方法得到拼接片段 并插入到真核表达载体 NA6． 0 / HisTM A ， pcDNA-PSmanA 。 PCR 、 、 ， ， 中 得到重组质粒 重组质粒经过 酶切 测序鉴定 证实含有目的片段 且读码框完全正 。 pcDNA-PSmanA (PK15) ， RT-PCR PK15 ， 确 在脂质体介导下将 转染猪肾 细胞进行分泌表达 通过 方法证实其在 细胞中表达 - 14 ． 5 IU / mL 。 并在细胞培养液中检测酶活性得到β 甘露聚糖酶基因酶活性为 : - PCR PK15 关键词 黑曲霉 β 甘露聚糖酶 重叠延伸 细胞 Secretion Expression of β-mannanase (manA)Gene in PK15 Cells from Asp ergillus niger Zou Xian1 Zhang Mao1，2 Xu Hui1 Lin Chun1 He Xiaoyan1 Liu Dewu1 Cai Gengyuan2 Wu Zhenfang1