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生物技术通报
·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( )
2015, 31 3 :171-177
黑曲霉柠檬酸工业菌株原生质体制备与转化
1，3 2，3 4 4 2，3
张晓立 郑小梅 满云 罗虎 于建东
2，3 1 2，3
郑平 刘浩 孙际宾
（1. 天津科技大学生物工程学院，天津 300457 ；2. 中国科学院系统微生物工程重点实验室，天津 300308 ；3. 中国科学院天津工业生物技术
研究所，天津 300308 ；4. 中粮生物化学（安徽）股份有限公司，蚌埠 233010）
摘 要 ： 黑曲霉是柠檬酸工业化生产的主要发酵菌株。尽管现代遗传操作技术在黑曲霉的实验室菌株、蛋白质生产菌株等
的应用中获得了成功，但是柠檬酸工业菌株遗传转化异常困难，成为柠檬酸工业持续升级的重要限制因素。以柠檬酸工业生产实
际应用的黑曲霉菌株为研究对象，对其原生质体的制备与再生以及PEG 介导的转化等条件进行了细致优化。结果表明，柠檬酸高
产工业菌株原生质体的制备需选取丰富培养基中培养48 h 的年轻菌丝体，在1.5% 裂解酶-0.5% 蜗牛酶-0.2% 溶菌酶的复合酶解体
6 个/mL 以上，原生质体再生效率可达90% 以上。原生质体的浓度是原生质体-PEG
系下裂解2.5 h，原生质体的制备浓度可达10
6 个/mL 以上时，高产柠檬酸菌株的转化效率大幅提高。成功建立了由原生质体-PEG
介导转化方法的关键，当原生质体浓度达到10
所介导的高产柠檬酸黑曲霉菌株的遗传转化体系。
关键词 ： 黑曲霉；柠檬酸 ；遗传操作系统 ；原生质体 ；DNA 转化
DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.04.025
Preparation of Protoplast for Efficient DNA Transformation of Citric
-
Acid Hyper producing Aspergillus niger Industrial Strain
1，3 2，3 4 4 2，3
Zhang Xiaoli Zheng Xiaomei Man Yun Luo Hu Yu Jiandong
Zheng Ping2，3 1 2，3
Liu Hao Sun Jibin
（1. School of Biological Engineering ，Tianjin University of Science and Technology ，Tianjin 300457 ；2. Key Laboratory of Systems Microbi
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