适合转录组测序的葡萄叶片总RNA试剂盒提取法的改进.pdf

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2013 6 适合转录组测序的葡萄叶片总 RNA 试剂盒 提取法的改进 1 1，2 1 1 1 2 杨晓燕  张波   黄方爱  颜欢  李月荣  郑秋生 （1. 石河子大学药学院，石河子 832002 ；2. 省部共建新疆特种资源植物药重点实验室，石河子 832002） 摘 要 ： RNA 试剂盒法是获取植物高质量RNA 样品的常用技术，针对3 种常见RNA 提取试剂盒在红地球葡萄叶样品RNA 提取效果进行评估和优化，以期找到适合红地球葡萄叶片RNA 表达谱测序需求的高质量RNA 提取策略。试验依据3 种试剂盒推 荐时间和条件进行RNA 提取，并对时间等条件进行优化，比对了优化前后RNA 质量。结果显示，试剂盒经优化后的方法提取的 RNA 收率高，完整性好，OD260/OD280 在 1.8-2.2 之间，OD260/OD230 大于2 ，28S 与18S 条带清晰完整，RNA-Seq 测序质量及基因覆 盖度符合要求。在红地球葡萄叶片上的RNA 提取结果表明，延长提取试剂与样品的接触时间操作可以显著提高RNA 提取质量 （纯 度/ 完整性）。 关键词 ： 红地球葡萄 RNA 提取 试剂盒法 转录组短枪测序法 The Improvement on the Protocols of Total RNA Extraction Kits for - RNA Seq from Grape Leaves 1 1，2 ’ 1 1 1 2 Yang Xiaoyan Zhang Bo Huang Fang ai Yan Huan Li Yuerong Zheng Qiusheng （1. School of Pharmaceutical Sciences ，Shihezi University ，Shihezi 832002 ；2. Key Laboratory of Xinj iang Endemic Phytomedicine Resources ， Ministry of Education ，School of Pharmacy ，Shihezi University ，Shihezi 832002 ） Abstract:  Commercial RNA extraction kits were wildly used in obtaining high quality RNA samples from plants. To seek the optimal method for the extraction of high quality RNA in RNA Expression Sequences Array （RNA-Seq ）, the topic of present article is to evaluate and optimize the effects of three common RNA extraction kits on leaves samples from grapevine