噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮模拟表位肽.pdf

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2013 1 噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮模拟表位肽 1 2 2 2 2 徐富勇  徐玲  刘仁荣  裘雪梅  朱立鑫  （1. 南昌大学生命科学与食品工程学院，南昌 330029 ； 2. 江西科技师范大学生命科学学院，南昌 330013） 摘 要 ： 拟用p Ⅷ 噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮 （Zearalenone ，ZEN ）模拟表位肽，并验证其反应原性。通过将含有 ZEN 模拟表位序列以及肠激酶酶切位点的寡聚核苷酸与经过 R I 和 H I 双酶切的pC89S4 噬菌粒连接，构建表达载体pC89- Eco Bam CZEN。pC89-CZEN 转化感受态XL1-Blue 得到工程菌pC89-ek-zen ，然后用KM13 超感染、IPTG 诱导表达，纯化后得到展示有玉米 赤霉烯酮模拟表位的噬菌体颗粒。对KM13 超感染时菌体浓度OD600 、IPTG 诱导时菌体浓度OD600 、IPTG 加入量以及诱导表达温度 和时间进行优化，以探索最佳表达条件 ；通过ELISA 测定反应原性，对比肠激酶酶切前后模拟表位肽与ZEN 抗体的结合效果。结 果显示，成功构建了表达载体pC89-CZEN ，最优表达条件为KM13 超感染时菌体浓度OD600 为0.4 、IPTG 诱导时菌体浓度OD600 为 0.6 以及IPTG 加入量为终浓度1.0 mmol/L、诱导表达温度为24 ℃、时间8 h ，酶切后结合效果明显高于酶切前。 关键词 ： 噬菌体展示系统 玉米赤霉烯酮 模拟表位 肠激酶 Expression of Zearalenone Mimicking Epitope Peptide by Phage Display System 1 2 2 2 2 Xu Fuyong Xu Ling Liu Renrong Qiu Xuemei Zhu Lixin （1. School of Lif e Sciences and Food Engineering ，Nanchang University ，Nanchang 330029 ； 2. School of Lif e Science ，Jiangxi Science Technology Normal University ，Nanchang 3300 13 ） Abstract:  The research was designed to study the expression of Zearalenone （ZEN ）mimicking epitope by p Ⅷ phage display system and verify its reactogenicity. An expression vector pC89-CZEN was constr