重组人EGFL6在HEK293细胞中的瞬时表达.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2013 9 重组人 EGFL6 在 HEK293 细胞 中的瞬时表达 亢中奎  张晋霞  姜浩武  王宏  宋其芳  黄建芳  邓宁 （广东省分子免疫与抗体工程重点实验室 暨南大学抗体工程研究中心，广州 510632） 摘 要 ： 旨在通过构建EGFL6 的真核表达载体，在HEK293T 细胞中进行表达，并利用HEK293T 细胞表达的EGFL6 条件 培养基，探讨EGFL6 对人黑色素瘤A375 细胞和人卵巢癌SKOV3 细胞增殖的影响。利用PCR 方法亚克隆得到的EGFL6 基因片 段及 基因片段，用重叠PCR 方法构建成 - 融合基因片段，并分别将测序正确的 - 6 融合基因片段及 EGFP EGFP EGFL6 EGFP EGFL EGFP 基因片段构建到真核表达载体pAAV 中。表达载体质粒去内毒素纯化后，瞬时转染HEK293T 细胞进行表达，荧光定位分析 和Western blot 检测EGFL6 的表达。CCK-8 试验分析含EGFP-EGFL6 融合蛋白的HEK293T 条件培养基对A375 细胞和SKOV3 细 胞的增殖能力的影响。结果显示，酶切鉴定pAAV-EGFP-EGFL6 和pAAV-EGFP 两个重组表达载体均构建成功 ；EGFP 荧光定位及 Western blot 结果均显示EGFP-EGFL6 在HEK293T 细胞中成功表达 ；增殖抑制试验结果显示EGFL6 促进了A375 和SKOV3 细胞的 增殖，对肿瘤细胞的促增殖率分别达到 （37.79 ±14.05 ）% 和 （30.53 ±6.31 ）%。成功地将EGFP 应用于EGFL6 真核表达载体的构 建与表达，结果表明人EGFL6 促进了A375 和SKOV3 细胞的增殖。 关键词 ： EGFL6 瞬时表达 HEK293T 肿瘤细胞 Transient Expression of Human EGFL6 in HEK293 Cells Kang Zhongkui Zhang Jinxia Jiang Haowu Wang Hong Song Qifang Huang Jianfang Deng Ning （ ， ， 510632 ） Guangdong Province Key Laboratory of Molecular Immunology and Antibody Engineering Jinan University Guangzhou Abstract:  To construct eukaryotic expression vector of EGFL6 and transient transform HEK293T cell to investigate EGFL6 effects on tumor cells with EGFL6 conditioned medium. EGFL6 gene fragments and enhanced green fluorescence protein （EGFP ）gene frag