Neuritin毕赤酵母表达系统的构建及对PC12细胞的影响.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第10期 Neuritin 毕赤酵母表达系统的构建及其对 PC12 细胞的影响 1，2 3 1，2 1，2 4 4 4 张树军   赵臣  狄建军   穆莎茉莉   仙玲玲  于娜  黄瑾 （1. 内蒙古民族大学 生命科学学院，通辽 028000 ；2. 内蒙古自治区高校蓖麻产业工程研究中心，通辽 028000 ；3. 包头北方医院普外科， 包头 014000 ；4. 石河子大学医学院新疆地方与民族高发病重点实验室，石河子 832002） 摘 要 ： 旨在构建Neuritin 的毕赤酵母表达系统获得大量有活性的Neuritin 蛋白，研究其神经生物学功能。PCR 扩增编码 neuritin 基因cDNA 序列，并纯化回收，通过酶切和连接插入穿梭载体pPIC9K 中，转化大肠杆菌DH5α，neuritin-pPIC9k 重组质粒 经PCR 与测序鉴定后，使用Sal Ⅰ酶切使其线性化，电击转化酵母菌GS115 ，经筛选与鉴定，成功构建了Neuritin 的毕赤酵母表 达系统。结果表明，使用甲醇诱导其表达，SDS和Western blot 分析得到11 kD 的Neuritin 蛋白，纯化的Neuritin 蛋白加入 PC12 细胞培养液中，能促进其突起的生长。 关键词 ： Neuritin pPIC9k 毕赤酵母表达系统 PC12 细胞 Constuction the Pichia pastoris Expression System of Neuritin and Its Impacts on PC12 Cell 1，2 3 1，2 1，2 4 4 4 Zhang Shujun Zhao Chen Di Jianjun Mushamoli Xian Lingling Yu Na Huang Jin （1. College of Lif e Science ，Inner Mongolia University f or Nationalities ，Tongliao 028000 ；2. Inner Mongolia Industrial Engineering Research Center of Universities f or Castor ，Tongliao 028000 ；3. Dep artment of General Surgery ，Baotou Northern Hosp ital ，Baotou 0 14000 ； 4. Key Laboratory of Xinj iang Endemic and Ethnic Disease University ，Shihezi 832002 ） Abstract:  It was to intend to construct Pichia pastoris expression system of neuritin, to obtain large amount of active Neuritin protein and study its neurobiological function. Encoding cDNA sequence of neuritin was amplified by PCR, then the fragment was digested a