基于重组大肠杆菌无细胞体系生产吡咯喹啉醌.pdfVIP

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2016-05-13 发布于安徽
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基于重组大肠杆菌无细胞体系生产吡咯喹啉醌.pdf

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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第期 2014 4 基于重组大肠杆菌无细胞体系生产吡咯喹啉醌 1 1 2 1 孙继国韩增叶葛喜珍田平芳（1. 北京化工大学生命科学与技术学院，北京 100029 ；2. 北京联合大学生物化学工程学院，北京 100023）摘要：采用无细胞体系生产吡咯喹啉醌（pyrroloquinoline quinone ，PQQ ）。首先将肺炎克雷伯氏菌PQQ 基因簇pqqABC- DEF 置于半乳糖苷酶启动子之下，构建表达载体，经转化筛选获得重组大肠杆菌。制备重组菌的细胞匀浆，体外反应后测定PQQ 产量。结果显示，与活体重组菌相比，无细胞体系的PQQ 产量提高约30% ，表明胞内存在PQQ 合成的限速反应，而无细胞体系可解除此限速反应。关键词：大肠杆菌无细胞体系吡咯喹啉醌限速反应 - Exploiting Cell free System of Recombinant E. coli to Synthesize Pyrroloquinoline Quinone 1 1 2 1 Sun Jiguo Han Zengye Ge Xizhen Tian Pingfang （1. College of Lif e Science and Technology ，， 100029 ；2. Beijing University of Chemical Technology Beijing College of Biochemical ，， 100023 ） Engineering Beijing Union University Beijing Abstract: In this study, cell-free system was developed to overproduce pyrroloquinoline quinone （PQQ ）. The PQQ gene cluster from Klebsiella pneumoniae was subcloned into vector harboring lac promoter and a recombinant Escherichia coli was acquired. Subsequently cell homogenate was prepared which showed ~30% increase of PQQ yield compared with in vivo biosynthesis. Not only revealing the presence of intracellular velocity-lim