IκBα缺失突变体真核表达载体的构建、表达及生物活性检测.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告 · B IO TECHN OLO G Y　BULL E T IN 2009年第 11期 κα I B 缺失突变体真核表达载体的构建 、 表达及其生物活性检测 黄思超1 杜军2 邱胜红1 徐俊1 傅刘鹏 1 马锦珊1 蔡绍晖1 ( 1暨南大学药学院 ,广州 , 510632; 2 中山大学药学院 ,广州 510006) κα 　　摘 　要 : 　旨在构建缺失 N 端前 36个氨基酸的 I B 突变体真核表达载体 ,并对其表达及生物学活性进行检测 。从人源 κα 子宫颈癌细胞 H eL a 中提取总 RNA ,利用 R TPCR 的方法获得 I B 缺失突变体的 cDNA ,将其克隆至真核表达载体 p cDNA 3. καΔ 1/m ycH is A 中 ,构建重组载体 p cDNA 3. 1I B N 。通过 PCR 方法 、N co Ⅰ酶切以及核酸测序分析对其进行鉴定 ;采用 W e stern κα καΔ κ α B lot检测 I B 缺失突变体蛋白在 H eL a细胞中的表达 。将 p cDNA 3. 1I B N 和 pN F B Luc共转染 H eL a细胞 ,经 TN F 诱 α 导后 ,利用萤光素酶报告系统来检测重组载体对 N F B 的抑制活性 。结果表明 ,经 PCR 方法 、N co Ⅰ酶切鉴定及核酸测序分析 καΔ κα κ 后 ,证实成功构建了重组载体 p cDNA 3. 1I B N ; I B 缺失突变体蛋白在 H eL a细胞中高效表达 ,并对 N F B 有显著的抑制 ( ) καΔ κ 活性 P 0. 0 1 。因此 ,真核表达载体 p cDNA 3. 1I B N 构建成功 ,为一步研究 N F B 信号传导通路及其相关疾病提供有效 的分子工具 。 κα κ 关键词 : 　I B 缺失突变体 载体构建 N F B Con struction and Expression of D eletion κα M utan t of I B and Its B ioactiv ity 1 2 1 1 1 1 1 Huang Sichao Du Jun