莱茵衣藻酰基辅酶A合成酶cDNA克隆及酵母表达.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 9 :119-124 莱茵衣藻酰基辅酶 A 合成酶 cDNA 克隆及其酵母表达 宋燕子  贾彬  林柏成  胡章立  黄瑛 （深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室 深圳市海洋藻类开发与应用工程实验室 深圳大学生命科学学院，深圳 518060） 摘 要 ： 旨在预测并克隆莱茵衣藻酰基辅酶A 合成酶cDNA（cracs ），分析其在酵母中的功能。RT-PCR 克隆cracs 序列， ClustalW 和MEGA6.0 软件分别分析其编码蛋白保守序列和进化树，表达并分析其在酵母YB525 中的底物偏好性。结果表明，首 次在莱茵衣藻中克隆获得一个cracs ，测序表明其序列大小为2 004 bp，编码667 个氨基酸，编码蛋白crACS 的预测分子量为72.3 kD， 包含酰基辅酶A 合成酶的两个保守区 ：AMP-binding 区和FACS 区。进化树比对显示，crACS 与拟南芥的长链酰基辅酶A 合 成酶LACSs 具有较高的同源性。酵母表达显示cracs 编码蛋白能互补酵母YB525 LACS 的缺陷表型，活化并优先利用C16 ∶1 和 C14 ∶0。 莱茵衣藻cracs 编码蛋白可活化外源脂肪酸，属于酰基辅酶A 合成酶家族。 关键词 ： 莱茵衣藻；酰基辅酶A 合成酶 ；酵母YB525 ；进化树 ；脂肪酸 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.09.016 - cDNA Cloning and Yeast Expression of Acyl CoA Synthetase of Chlamydomonas reinhardtii Song Yanzi Jia Bin Lin Baicheng Hu Zhangli Huang Ying - （Shenzhen Key Laboratory of Marine Bioresource and Eco environmental Science ，Shenzhen Engineering Laboratory of Marine Algae Biotechnology ，College of Life Sciences ，Shenzhen University ，Shenzhen 518060 ） : This work aims to predict and clone cDNA of cyl-CoA synthetase（gene ）, and analyze its Abstract Chlamydomonas reinhardtii a cracs function in yeast Saccharomyces cerevisiae YB525. The cracs sequence was cloned by RT-PCR, its conserved sequence of encoded protein and phylogenetic tree were analyzed with Clusta