金鱼藤中ApNAP基因的克隆和表达模式分析.pdfVIP

植物科学学报　 ２０１４ꎬ３２(３):２５１~２５８ Ｐｌａｎｔ ＳｃｉｅｎｃｅＪｏｕｒｎａｌ 　 　 ＤＯＩ:１０３７２４/ ＳＰＪ１１４２２０１４３０２５１ 金鱼藤中ＡｐＮＡＰ基因的克隆和表达模式分析 ∗ 樊金萍 ꎬ赵 然 (东北农业大学园艺学院ꎬ哈尔滨 １５００３０) 摘　 要:金鱼藤(Ａｓａｒｉｎａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ)是玄参科金鱼藤属多年生藤本植物ꎬ 在园林中常用于垂直绿化ꎬ 是良好 的观赏植物ꎬ 但金鱼藤叶片衰老后很快干枯并脱落ꎬ 仅留光秃的茎蔓ꎬ 使其观赏价值大大降低ꎮ ＡｔＮＡＰ是拟南 芥 ＮＡＣ基因家族中与衰老相关的转录因子ꎬ 在调控叶片衰老过程中有重要的作用ꎮ 本研究以金鱼藤衰老叶片为 材料ꎬ 运用ＲＴ￣ＰＣＲ和ＲＡＣＥ技术克隆金鱼藤中ＡｐＮＡＰ基因ｃＤＮＡ序列ꎮ 结果显示ꎬ 该基因位于细胞核中ꎬ ｃＤＮＡ全长为１３４１ｂｐꎬ 开放阅读框为９３６ ｂｐꎬ 编码３１１个氨基酸ꎬ 相对分子量为３５２１ ｋＤꎬ 等电点为９１３ꎻ ＡｐＮＡＰ基因组全长１５２６ ｂｐꎬ 含有２个内含子和３个外显子ꎮ 多重序列比对表明ꎬ ＡｐＮＡＰ属于ＮＡＣ转录因子 家族ꎮ 系统进化树分析显示ꎬ ＡｐＮＡＰ属于ＮＡＰ亚组ꎬ 与ＡｔＮＡＭ的同源关系最近ꎮ 实时荧光定量 ＰＣＲ结果表 明ꎬ 受自然状态下衰老和黑暗处理的诱导ꎬ ＡｐＮＡＰ基因表达量增加ꎬ 这进一步说明ＡｐＮＡＰ基因参与调控金鱼 藤叶片衰老的过程ꎮ 该基因的分离对利用转基因技术延缓金鱼藤叶片衰老ꎬ 提高金鱼藤在园林绿化中的观赏价 值具有实际意义ꎮ 关键词:金鱼藤ꎻ 基因克隆ꎻ ＡｐＮＡＰꎻ 荧光定量ＰＣＲ 中图分类号:Ｑ９４３　 　 　 　 　 文献标识码:Ａ　 　 　 　 　 文章编号:２０９５￣０８３７(２０１４)０３￣０２５１￣０８ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＰａｔｔｅｒｎＡｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡｐＮＡＰ Ｇｅｎｅ ｉｎＡｓａｒｉｎａ ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ ∗ ＦＡＮＪｉｎ￣Ｐｉｎｇ ꎬＺＨＡＯ Ｒａｎ (Ｃｏｌｌｅｇｅ ＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅꎬＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＨａｒｂｉｎ １５００３０ꎬＣｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ａｓａｒｉｎａ ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓꎬＳｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｃｅａｅꎬ ｉｓ ａ ｐｅｒｅｎｎｉａｌ ｖｉｎｅ ａｎｄ ｇｏｏｄ ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ ｐｌａｎｔ ｆｏｒｖｅｒｔｉｃａｌｇｒｅｅｎｉｎｇ ｉｎｔｈｅｇａｒｄｅｎ.Ｈｏｗｅｖｅｒꎬｗｈｅｎｔｈｅ ｌｅａｖｅｓｏｆＡｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ ｂｅｃｏｍｅ ｄｒｙ ａｎｄａｂｓｃｉｓｅｄａｆｔｅｒｓｅｎｅｓｃｉｎｇꎬｔｈｅ ｂａｒｅｔｅｎｄｒｉｌｓｇｒｅａｔｌｙ ｒｅｄｕｃｅ ｉｔｓｏｒｎａｍｅｎｔａｌｖａｌｕｅ.ＡｔＮＡＰ ｉｓ ａ ＮＡＣ ｆａｍｉｌｙ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈａｔ ｐｌａｙｓ ａ ｋｅｙ ｒｏｌｅ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｌｅａｆ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ. Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬ ＡｐＮＡＰꎬ ａ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｇｅｎｅ ｏｆ ＡｔＮＡＰꎬ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｆｒｏｍ Ａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ ｓｅｎｅｓｃｅｎｔ ｌｅａｖｅｓ ｂｙ ＲＴ￣ＰＣＲａｎｄ ＲＡＣＥ.ＲｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＡｐＮＡＰｇｅｎｅ ｗａｓ ｌｏｃａｔｅｄ ｉｎｔｈｅ ｎｕｃｌｅｕｓ ａｎｄ ｈａｄ ａ ｔｏｔａｌ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ １３４１ ｂｐ ｗｉｔｈ ａｎ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ｏｆ ９３６ ｂｐꎬｅｎｃｏｄｉｎｇ３１１ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓꎬｏｆ ｗｈｉｃｈｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ ｗ