负载肝癌细胞裂解物树突状细胞β-中心体肌动蛋白表达下调和肝癌免疫逃逸的关系.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 负载肝癌细胞裂解物树突状细胞13．中心体肌动蛋白表达下调与肝癌 免疫逃逸的关系 肿瘤与宿主免疫微环境的相互作用在肿瘤的发生、发展与转移中有重要意 义。较强的免疫微环境有助于控制肿瘤发生发展，而免疫耐受的微环境则可能促 进这一进程。肝脏是免疫特惠器官，参与全身和局部的免疫调节，在免疫反应中 更多表现为免疫挪制使其成为牌瘤好发部位。肝癌的免疫逃逸枫截非常复杂，除 了肿瘤抗原的丢失和调变、MHC分子表达下调等被动方式逃逸免疫攻击外，它 通过对树突状细胞(Denddticcell，DC)功能和表型的影响主动抑制宿主的免疫功 能。在肝癌局部免疫微环境中，DC的表型和抗原提呈功能均受影响，并导致肝 癌免疫逃逸的发生。 已有钓瓣瘤免疫逸逸机铋研究多来自体外实验。研究发现体内的抗肿瘤免疫 与体外可检测的免疫功能并不完全一致，体外获取的数据不能真正代表在体的免 疫状况。传统的免疫学研究手段信息量小，无法全面准确反映在体免疫细胞的功 能变化。对肿瘤逃逸的研究应综合考虑肿瘤和宿主免疫细胞的相互作用，在无法 完全实现在体研究条件下。～定程度上模拟体内状况，能获得较准确的结果。 DC是功能最强的抗躁递呈缨隐，是启动、谖控和维持免疫韵重要环节。并影响 免疫反应的最终走向，因此我们选择DC作为研究对象，结合高通量和高灵敏度 的蛋白质组学方法，以期从整体水平更好了解IX2功能异常与肝癌免疫逃逸的关 系。 本课题研究分四个部分。第一部分，以DC为代表，评价肝癌患者的免疫状 况；第二部分，采用不葡转移潜能肝癌裂解物负载DC，应用蛋自质组学方法， 在蛋白质水平上对比研究负载DC后蛋白表达谱的差异及其与DC功能改变之间 的关系；在第三部分对其中一个差异蛋白进行验证和定位，在最后部分从临床角 度对差异蛋白进行进一步的验证，并分析该蛋白与肝癌病理特性的关系。 我们发现DCB．centractin表达水平下调与DC表型和功能异常相关。据我们 所知，这是在国际上首次发现e-ce船a髓．m表达与黔瘤逃逸的关系。研究结果初 步提示肝癌可能通过下调DC 逃逸。 中文摘要 第一部分 乙肝相关肝癌外周血树突状细胞负载肿瘤细胞裂解物前后免疫功能的变化 目的：评估有乙型肝炎背景肝癌患者外周血单个核细胞来源树突状细胞表面分子 表达及负载肿瘤抗原|ii『后的免疫功能，探讨乙肝(黜v)相关肝癌患者因感染 HBV导致免疫微环境改变对DC功能的影响，以及与免疫逃逸的关系。方法： 分离18例乙肝相关原发性肝癌、ll例乙肝肝硬化患者和10例健康献血者外周 血单个核细胞，体外培养加入重组入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和IL．4诱导 生成DO，以共聚焦显微镜和扫描电镜观察形态，以流式细胞仪检测DC表面 株HCCLM6制备的细胞裂解物分别负载肝癌、肝硬化和正常人来源的DC，最 后以混合淋巴细胞反应(MLR)铡定DC负载前后刺激同种异型T淋巴细胞增 殖能力，并测定MLR上清中IL．12的含量。结果；正常组、肝硬化组和肝癌组 CD86等分子表达水平低于正常组(／70．05)；负载肿瘤裂解物前肝硬化和肝癌组 刺激同种异型T淋巴细胞增殖能力和MLR上清中IL．12含量明显低于正常组， 负载肿瘤抗原后三组均有显著提高，并以肝硬化组提高最为明显，但IL．12含量 仍低予正常组。结论t乙肝相关的肝硬化积肝癌患者因感染HBV导致免疫微 环境改变对DC表型和功能有抑制作用，是导致肝癌免疫逃逸的重要机制；负载 肿瘤裂解物可减轻免疫逃逸程度，但相比正常人DC，肝细胞癌患者DC体外负 载肿瘤裂解物后仍存在表型和功能的缺陷，可能无法进行有效的肿瘤免疫治疗； 肝硬化患者DC仍有一定功能，可能是其尚未发展成肝癌的一个原因。 第二部分 树突状细胞负载不同转移潜能人肝癌细胞裂解物的蛋白质谱变化 目的：了解负载不同转移潜能肝癌细胞裂解物和正常肝细胞裂解物后树突状细胞 蛋白质表达谱的差异。方法：以不同转移潜能人肝癌细胞株(HCCLM6．高转移、 Liver) MHCC97L．低转移、Hep3B．不转移)制