抗egfr抗kdr双特异性单链抗体的构建及其表达.pdfVIP

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2016-05-14 发布于安徽
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抗egfr抗kdr双特异性单链抗体的构建及其表达.pdf

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药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 12, 47 ( 10): 1317 1322 ·1317 · EGFR/ KDR 双特异性单链体的构建及表达 * * 周雅琼, 张娟 , 金海珍, 何远, 王彤, 王旻 ( 中国科大学, 天然物活性物质与功能国家重点实验室, 江苏南京 2 10009) 摘要: 针对EGFR 或VEGFR 信号通路的相互作用导致的耐药性, 为增强抗EGFR 或抗VEGFR2 抗体单独使用疗效不佳的癌症的治疗效果, 本文利用重叠PCR 将抗人EGFR 胞外区单链抗体基因scFv-E 10 和抗人VEGFR2 (KDR) 的单链抗体基因scFv-AK404R 融合在一起, 得到抗EGFR/抗KDR 双特异性单链抗体 (bispecific single- chain diabody, scDb) 基因, scDb 的连接肽序列为 15 个氨基酸 (G S) , 在肽链的C 端引入His 标签及myc 标签 4 3 将scDb 基因连接入载体pHEN2, 转化大肠杆菌HB2 151 并诱导表达, 经镍柱纯化获得电泳纯scDb 蛋白, 产量约为570 μg ·L 1 发酵液 ELISA 测定显示, scDb 与EGFR 胞外区的结合与亲本scFv-E 10 相当, 与KDR 胞外区的结合略低于亲本scFv-AK404R, 表明抗EGFR/抗KDR scDb 可与EGFR 和KDR 两种抗原特异性结合, 可用于进一步的抗肿瘤活性研究关键词: 表皮生长因子受体; 血管内皮生长因子受体2; 双特异性单链抗体; 单链抗体; 原核表达中图分类号: R963 文献标识码: A 文章编号: 05 13-4870 (20 12) 10- 1317-06 Construction and expression of an anti-EGFR/anti-KDR bispecific single-chain diabody * * ZHOU Ya-qiong, ZHANG Juan , JIN Hai-zhen, HE Yuan, WANG Tong, WANG Min (State Key Laboratory of Natural Medicines, China Pharmaceutical University, Nanj ing 210009, China) Abstract: Bispecific antibodies have been exploited as both cancer imm