稳定表达鸡B-LB基因的P815细胞株的建立及其鉴定.pdf

摘要 体上的一组紧密连锁的基因位点组成的高度多态的基因群。MHC在脊椎动物体内普 遍存在，其编码产物称为主要组织相容性抗原，与免疫功能密切相关，能够控制移植 排斥反应、应答免疫以及调节免疫等。根据化学结构、组织分布及功能上的特点可将 MHC分为I、II、III三类。其中，MHC II类分子是由a链和p链非共价键相连组成 的一组高度多态的跨模型糖蛋白，在结构上MHCII类分子分成肽结合区、Ig样区、 跨膜区和胞浆区4个部位。鸡的MHC基因又称为B复合体，定位在16号微小染色 体上。根据鸡的MHC基因编码蛋白类型的不同，我们把鸡的MHC分子分为B．F、 B—L、B—G三类分子。其中B．L分子主要递呈外源性抗原，和哺乳动物的MHC11分 子具有同源性。编码B．L分子的基因包括编码Q链的B一以和编码B链的B一三B。本课 题就是研究表达鸡MHCII—B分子的B一￡B。 相对于I类分子分布的广泛性，II类分子的分布比较局限，主要表达与B细胞、 单核细胞，巨噬细胞和树突状细胞等专职抗原提呈细胞表面，还包括精子细胞以及某 些活化的T细胞表面。MHC11分子的主要功能是递呈外源性抗原片段，通过形成MHC II．抗原肽复合物诱导和激活特异性的免疫应答反应。为了进一步研究鸡MHCII类分 II—B链在 子两条肽链在递呈抗原及免疫应答中的作用，尤其是较为多态性的鸡MHC 鸡MHCII中的作用，本课题采用分子生物学技术和细胞生物学技术，对MHCII．B 因的细胞株。 首先，从GellBank中查获禽类MHc 多克隆酶切位点和鸡MHC II—p链基因序列分别设计两对引物。同时从鸡MHCII—p 引物经RT—PCR检测，成功得到了目的条带461bp。 结果表明本研究成功地克隆了鸡MHCII—p链基因并成功构建了 II II的抗肿瘤免疫学药物的 一p融合蛋白的小鼠肥大细胞瘤P815细胞株，为针对MHC 药效评价建立了肿瘤细胞模型，同时为进一步研究鸡MHCII的结构与功能奠定了基 础。 关键词：B一上B，稳定转染，P815，COS7 Abstract Major locatedin histocompatibilitycomplex(MHC)，a c王lromosome genicsystem whichmakesofa ofclose and group liI水age was h迢hlypolymoIphismgene10cus，which foundinalmostaU Vertebrates．MHCmolecules generally arealsoconsideredasthe detemlinants primary inthe and transplantrejection，immuneimmune respond regulation． totheirstl．ucturesand molecules