为建立高效肝特异性条件性基因剔除小鼠所设计的转录与酶活性水平上对Cre重组酶的严谨双重调控系统.pdfVIP

第一部分 中文摘要 第一部分 中文摘要 随着人类基因组图谱的完成，以诠释活体内基因功能的研究已经大规模地启 动，特别是那些与疾病相关的基因的研究更受重视。建立组织特异性基因打靶的 小鼠品系已成为后基因组时代研究基因功能最直接和最有效的方法之一。 ， 基于同源重组原理。运用Cre／IoxP位点特异性重组酶系统的基因打靶技术， 通过建立转基因小鼠家系，既可以通过定点切除基因以进行基因功能失去方面研 究又可特异性地在多种组织以及胚胎干细胞基因组中引入预定的突变，以研究该 基因的功能及其与相关疾病发生、发展的关系，因而是建立功能基因组模型以及 人类疾病动物模型的主要途经。肝癌是最常见的人类恶性肿瘤之一，而我国的肝 癌发生率和死亡率均居世界之首。但迄今为止对于肝癌的发生发展机制知之甚 少，缺乏早期诊断及特异性治疗的手段。目前。虽然可诱导组织特异性Cre／IoxP 系统被逐渐完善并且越来越多的特定组织肿瘤基因剔除小鼠模型被建立，然而该 系统仍然存在靶基因的渗漏表达及在生殖细胞中敲除发育相关基因造成胚胎致 死等缺点，造成目前仍没有肝特异性的肿瘤小鼠模型被建立。从而阻碍了对肝癌 的发病原因及治疗方案研究的深入。 为了能建立肝癌小鼠模型且更深入地探讨肝癌的发病机制，本课题将构建一 个转录和翻译后双重水平调控肝特异性表达的Cre重组酶系统：第一，运用肝 ofC／EBP 特异性启动子Promoter D调控Tet-off诱导系统中四环素激活蛋白的表 达，从而在转录水平上调控Cre重组酶的表达；第二，应用Tamoxifen激活系 统以蛋白问相互作用方式在翻译后水平上对Cre重组酶活性进行调控。并且在 细胞水平上检测了该系统中Cre重组酶的肝特异性表达及其活性受调控情况。 该系统的转基因小鼠的建立将为进一步的肝特异性基因剔除小鼠的建立，以及肝 癌小鼠模型的建立提供有力的技术手段。 复旦大学医学院 上海市肿瘤研究所 硕士论文 第一部分 英文摘要 Abstract Themost to the vivoin stringentapproach function／n studygene isitsknock-outinboth development spatial(celltypespecific)andtemporal of is achieveduse (developmentstagespecific)manners，which commonlyby a modifiedmousestrainwithits genetic Crerecombinaseunderthe activity controloftheneeded and precision pattem． Crerecombinase—mediatedrecombinationof site．specific chromosomally