红花中羟基红花黄色素A的纯化工艺研究.docVIP

红花中羟基红花黄色素A的纯化工艺研究 　　摘 要：本实验对红花中羟基红花黄色素A的纯化工艺进行研究。分别采用聚酰胺复合膜NF270-400、聚酰胺复合膜NF200-400、聚酰胺复合膜NF90-400进行纯化实验。实验结果表明采用聚酰胺复合膜NF200-400效果最好。本工艺稳定、可行、收率高。 中国论文网 /8/view-7203988.htm 　　关键词：红花；纯化；工艺 　　红花别名为红蓝花（《金匮要略》），红蓝（崔豹《古今注》），红花草（《履?f岩本草》），刺红花（《四州中药志》），草红花（《陕西中药志》），黄蓝（《博物志》），红花菜（《救荒本草》）。 　　红花具有活血通经，去瘀止痛的功效。红花常用于治疗经闭、难产、死胎、产后恶露不行、瘀血作痛、跌扑损伤等[1-2]。《开宝本草》记载：“主产后血运口噤，腹内恶血不尽、绞痛，胎死腹中，并酒煮服。亦主蛊毒下血。”红花含有红花甙（carthamin）、前红花甙（precarthamin）、红花黄色素（safflow yellow）A、绿原酸（chlorogenic acid）、儿茶酚（cate-chol）、焦性儿茶酚（pyrocatechol）、2-已醇（2-hexanol），（E）-2-已烯醛〔（E）-2-hexenal〕、对二甲苯（p-xylene）、1，2，3-三甲氧基-5-甲基苯（1，2，3-TCMLIBimethoxy-5-methylbenzene）、α-柏木烯（α-cedrene）、?草烯（humulene）等成分。羟基红花黄色素A是红花药理功效的最有效水溶性部位，是红花黄色素的活血化瘀有效成分[3-5]。本实验对红花中羟基红花黄色素A的纯化工艺进行研究。 　　1 仪器与试药 　　WP-UP-Ⅲ-20精密型实验室专用超纯水机（四川沃特尔水处理设备有限公司）；科捷仪器LC600A液相色谱仪（南京科捷分析仪器有限公司）；LC-10B系列液相色谱仪（杭州科晓化工仪器设备有限公司）；Lanbo恒温柱温箱（天津市兰博实验仪器设备有限公司）；Cascada BIO 实验室超纯水系统（颇尔过滤器（北京）有限公司）；英国Grant冷冻离心机PCV-3000 PCV-4200R（深圳市标远科学仪器有限公司）；GLITRING-6实验室清洗机（北京嘉信怡达科技有限公司）；上海舜宇恒平AE124C内校电子分析天平（北京联合科仪科技有限公司）。羟基红花黄色素A对照品（中国药品生物制品检定所提供）。乙腈（上海甲美精细化工有限公司）；盐酸（常州通诚化工有限公司）；磷酸（天津博达盛业化工产品有限公司）；甲醇（上海甲美精细化工有限公司）；氢氧化钠（常州通诚化工有限公司）。 　　2 方法与结果 　　2.1 提取 　　按处方称取药材，至于圆底烧瓶内，分别提取三次，第一次加12倍的蒸馏水（用盐酸调PH值为3），60摄氏度提取60分钟，过滤，合并滤液，用氢氧化钠调PH值为7，减压浓缩；第二次加10倍的蒸馏水（用盐酸调PH 值为3），60摄氏度提取50分钟，过滤，合并滤液，用氢氧化钠调PH值为7，减压浓缩；第二次加8倍的蒸馏水（用盐酸调PH值为3），60摄氏度提取40分钟，过滤，合并滤液，用氢氧化钠调PH值为7，减压浓缩，合并三次浓缩液混匀。采用高效液相测定浓缩膏中羟基红花黄色素A含量并计算羟基红花黄色素A收率。 　　2.2 纯化 　　分别采用聚酰胺复合膜NF270-400、聚酰胺复合膜NF200-400、聚酰胺复合膜NF90-400进行纯化实验。聚酰胺复合膜NF270-400切割分子量为1000、聚酰胺复合膜NF200-400切割分子量为600、聚酰胺复合膜NF90-400切割分子量为300。红花中羟基红花黄色素纯化结果见表1。 　　3 含量测定方法 　　3.1 色谱条件 　　色谱柱为Waters SunFire C18液相色谱柱（规格250×4.6mm，5um）；甲醇-水-磷酸=70∶30：0.12为流动相；检测波长为403nm；流速1.0mLmin-1。 　　3.2 供试品溶液的制备 　　取提取膏，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水10ml，称定重量，超声处理五分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，取上清液，滤过，取续滤液，即得。 　　3.3 对照品溶液的制备 　　精密称取羟基红花黄色素A对照品，用甲醇溶解稀释，配制成每1mL溶液中含羟基红花黄色素A 200μg的对照品溶液。 　　3.4 标准曲线的制备 　　将浓度为50μg/ml，100μg/ml，300μg/ml，500μg/ml，700μg/ml，800μg/ml，900μg/ml的对照品溶液分别吸取20μL注入HPLC，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值A为纵坐标，绘制标准曲线。试验表明