Coombs试验概要.pptVIP

抗人球蛋白试验（ Coombs试验 ） Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，使红细胞凝集。 抗人球法是检测不完全抗体的经典方法，其方法有两类。 直接Coombs试验：是检查被检红细胞上有无不完全抗体。 间接Coombs试验：是检查血清中游离的不完全抗体 天然抗体与免疫血型抗体比较 抗球蛋白试验 试剂及器材 1、多特异性抗球蛋白试剂（lgG、C3d）； 2、柱凝集抗人球卡； 3、阳性对照细胞（取3份正常人O型Rh（D）阳性红细胞等量混匀，经生理盐水洗涤后取少量压积红细胞，加抗D血清，置37℃水浴致敏1小时，取出后用生理盐水洗涤3次，配成5%红细胞悬液）； 4、阴性对照细胞（取3份正常人O型红细胞等量混匀，经生理盐水洗涤后，配成5%红细胞悬液；或直接取Rh（D）阴性红细胞）； 5、受检者5%（1%）红细胞悬液； 6、0.9%生理盐水； 7、柱凝集卡式配血系统 8、滴管（加样枪）、蜡笔或记号笔、试管、显微镜、37℃水浴箱、细胞洗涤离心机等。 直接抗球蛋白试验 （DAT） 原理 患者体内若有与红细胞抗原不相合的不完全抗体存在，可与红细胞结合形成抗原抗体复合物。 但因不完全抗体分子量小，不能有效地连接抗原抗体复合物，仅使红细胞处于致敏状态。 加入抗球蛋白血清，与红细胞上吸咐的不完全抗体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼可见的凝集。 这种直接检测体内被抗体或（和）补体致敏红细胞的试验称之为直接抗球蛋白试验。 手工法操作 1、 取患者抗凝全血适量于试管中，加生理盐水洗涤3次，最后一次洗涤离心后，弃上清液，用生理盐水配成5%红细胞悬液； 2、 取3支试管，作好标记（患者、阳性、阴性）； 3、 取患者5%红悬液1滴于试管中，加生理盐水洗涤一次；尽可能弃净上清液； 4、 在阳、阴性试管中分别加入阳性和阴性对照红悬液1滴； 5、 在各管中滴加多特异性抗球蛋白试剂1滴，混匀； 6、 同时以1000r/min离心1分钟，轻轻摇动，先用肉眼观察管底红细胞的凝集，再用低倍镜观察 柱凝集卡式法操作 1、取出柱凝集Coombs卡、室温平衡并做好标记（患者、阳性、阴性）。 2、分别加入1%被检红悬、阳性红悬、阴性红悬各50 ul。 3、不孵育，将卡放入专用离心机离心。 4、取出凝集Coombs卡，观察试验结果。 DAT操作表 微柱卡Coombs试验RBC可免洗涤 因为RBC的密度远大于血清中的球蛋白，当 离心时，RBC的沉降速率远大于球蛋白，故 RBC首先和凝胶中的抗人球蛋白反应，而不受 血清中的球蛋白干扰，从而可免除洗涤这一 步骤。 结果判断 先观察阴性和阳性对照管，阴性对照管无凝集，阳性对照管出现+++—++++凝集，说明检测管结果可信。 被检测管凝集，直接抗球蛋白试验阳性，不凝集者为阴性。如果实验结果为阴性，要加阳性细胞检测，结果为阳性，说明该阴性结果可靠。 柱凝集判断标准 间接Coombs试验 （IAT） 原理 用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不完全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上相应的抗原。 在37℃条件下，若被检血清或红细胞有对应的不完全抗体或抗原，则抗原抗体作用使红细胞致敏 再加抗人球蛋白试剂，与红细胞上不完全抗体结合，出现肉眼可见凝集。 这种通过体外将红细胞致敏后，再检测红细胞有无不完全抗体或抗原的试验称为间接抗人球蛋白试验。 手工法操作 取被检血清200ul 于试管中，加入等量5%已知抗原红悬液（或被检5%红悬液加入等量已知抗体血清），置37 ℃水浴1小时。如血清与红细胞存在相应特异性抗原抗体，则会使红细胞致敏。 取出试管，用生理盐水洗涤后，参照直接Coombs试验方法操作。 实验结果为阳性，说明受检者血清中有与已知红细胞抗原相对应的不完全抗体（或被检者红细胞上有与已知抗体相对应的抗原 柱凝集卡式法操作 1、取出柱凝集Coombs卡、室温平衡并做好标记（患者、阳性、阴性）。 2、在患者孔中加入被检血清和1%已知抗原红悬液各50ul（或加入已知抗体血清和1%待检抗原红悬液各50ul） 3、在阳性、阴性孔中加入相应1%红悬液50ul 4、同时放入专用孵育器孵育 5、取出用专用离心机离心。 6、实验结果同手工法 Coombs’试验临床意义 正常人Coombs试验直接与间接试验均为阴性 本试验是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重要依据，特别是IgG型引起的溶血性贫血，直接反应常呈强阳性，间接反应大多阴性，但亦可阳性 新生儿同种免疫溶血病：因Rh血型不合所致溶血病，直接及间接反应均强阳性，持续数周、换血输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合引起 的溶血病，直接常为阴性或弱阳性，间接反应为阳性 药物诱发的免疫性溶血性贫血 ①α-甲基多巴型：直接及间接反