第三章细胞生物学的研究方法解析.ppt

观察结果 相差显微镜观察真菌菌丝 THE END! 电镜超薄切片样本制备示意图 Figure 3-20. Electron micrograph of a root-tip cell stained with osmium and other heavy metal ions. The cell wall, nucleus, vacuoles, mitochondria, endoplasmic reticulum, Golgi apparatus, and ribosomes are easily seen. 超薄切片技术显示的动物细胞超微结构 家蚕细小病毒负染色电镜照片（病毒直径20nm） II. Scanning electron microscope (SEM) Images of surfaces can be obtained by SEM; Critical-point drying; Range: 15－150,000 X. Resolution: 5nm Figure 3-23. Scanning electron microscopy. Scanning electron micrograph of the stereocilia projecting from a hair cell in the inner ear of a bullfrog (A). For comparison, the same structure is shown by differential-interference-contrast light microscopy (B) and by thin-section electron microscopy (C). ????????????????????????????????????????????????????Figure 3-32. Cells in culture. Scanning electron micrograph of rat fibroblasts growing on the plastic surface of a tissue-culture dish. 扫描电镜原理示意图（A），扫描电镜下可清晰地显示原生动物四膜虫表面的纤毛和口器（B） 三、隧道扫描显微镜 ?原理：扫描探针与样品接触或达到很近距离时，即产生彼此间相互作用力，如量子力学中的隧道效应（隧道电流）、原子间作用力、磁力、摩擦力等，并在计算机显示出来，从而反映出样品表面形貌信息、电特性或磁特性等。 ?特点：（1）可对晶体或非晶体成像，无需复杂计算，且分辨本领高。（侧分辨率为0.1～0.2nm，纵分辨率可达0.01nm）； （2）可实时得到样品表面三维图象，可测量厚度信息； （3）可在真空、大气、液体等多种条件下工作；非破坏性测量； （4）可连续成像，进行动态观察。 ?用途：纳米生物学研究领域中的重要工具,在原子水平上揭示样本表面的结构。 几种显微镜可观察的样品大小（箭头之间的范围）及其分辨能力（右侧箭头所指位置） 分辨率：能区分开两个质点间的最小距离 眼睛、光学显微镜和电子显微镜的分辨率分别为：0.2mm、0.2μm和0.2nm。 第二节 细胞及其组分的分析方法 一、用超离心技术分离细胞组分 二、细胞成分的细胞化学显示方法 三、特异蛋白抗原的定位与定性 四、细胞内特异核酸的定位与定性 五、定量细胞化学分析与细胞分选技术 一、用超离心技术分离细胞组分 用差速离心法分离细胞匀浆中的各种细胞组分 用密度梯度离心分离细胞组分示意图 用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。 二、细胞成分的细胞化学显示方法 为了测定蛋白质、核酸、多糖和脂质等细胞组分，通常利用一些显色剂与所检测物质中一些特殊基团特异性结合（反应）的特征，通过显色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中的分布和相对含量。 A: 直接免疫荧光标记技术：利用偶联荧光分子的抗体与细胞或细胞切片进行孵育，使抗体和相应抗原结合，在荧光显微镜下对抗原进行定位的技术。 B: 间接免疫荧光标记技术：即不带荧光标记的第一抗体与相应抗原孵育形成复合物后，再用荧光标记的第二抗体识别第一抗体，从而显示抗原所在位置。 三、特异蛋白抗原的定位与定性 免疫胶体金电镜原位杂交技术的基本原理与应用（膀胱上皮细胞膜蛋白的分布：箭头所指） 四、细胞内特异核酸的定位与定性 原位杂交（in situ hybridization ）：通过单链RNA或DNA探针对细胞或组织中的基因或mRNA进行定位的技术