酶(版已改)分析报告.ppt

第三章 酶 酶的概念 酶学研究简史 公元前两千多年，我国已有酿酒记载。 一百余年前，Pasteur认为发酵是酵母细胞生命活动的结果。 1878年，Kühne首次提出Enzyme一词。 1897年，Eduard Buchner用不含细胞的酵母提取液，实现了发酵。 1926年，Sumner首次从刀豆中提纯出脲酶结晶 (deoxyribozyme)。 1982年，Cech首次发现RNA也具有酶的催化活性，提出核酶(ribozyme)的概念。 1995年，Jack W.Szostak研究室首先报道了具有DNA连接酶活性DNA片段，称为脱氧核酶(deoxyribozyme)。 第一节酶的分子结构与功能The Molecular Structure and Function of Enzyme 酶的不同形式: 单体酶(monomeric enzyme)：仅具有三级结构的酶。 寡聚酶(oligomeric enzyme)：由多个相同或不同亚基以非共价键连接组成的酶。 多酶体系(multienzyme system)：由几种不同功能的酶彼此聚合形成的多酶复合物。 多功能酶(multifunctional enzyme)或串联酶(tandem enzyme)：一些多酶体系在进化过程中由于基因的融合，多种不同催化功能存在于一条多肽链中，这类酶称为多功能酶。 全酶分子中各部分在催化反应中的作用: 全酶决定酶的活性 酶蛋白决定反应的特异性 辅助因子决定反应的种类与性质 二、酶的活性中心是酶分子中执行其催化功能的部位 活性中心内的必需基团 三、同工酶 同工酶存在于同一个体的不同组织或同一细胞的不同亚细胞结构中，它使不同的组织和不同的亚细胞结构具有不同的代谢特征。 第二节 酶的工作原理The Mechanism of Enzyme Action 在反应前后没有质和量的变化； 只能催化热力学允许的化学反应； 只能加速可逆反应的进程，而不改变反应的平衡点。 通过降低反应所需的活化能来加快化学反应的速度 （一）酶促反应的高效性 一种酶仅作用于一种或一类化合物，或一定的化学键，催化一定的化学反应并生成一定的产物。酶的这种特性称为酶的特异性或专一性。 根据酶对其底物结构选择的严格程度不同，酶的特异性可大致分为以下3种类型： 绝对特异性(absolute specificity)：只能作用于特定结构的底物，进行一种专一的反应，生成一种特定结构的产物 。 相对特异性(relative specificity)：作用于一类化合物或一种化学键。 立体结构特异性(stereospecificity)：作用于立体异构体中的一种。 诱导契合作用使酶与底物密切结合 2.邻近效应与定向排列使诸底物正确定位于酶的活性中心 第三节 酶促反应动力学 Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction 酶促反应动力学：研究各种因素对酶促反应速率的影响，并加以定量的阐述。 影响因素包括：酶浓度、底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等。 一、底物浓度对反应速率影响的作图呈矩形双曲线 在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速率的影响呈矩形双曲线关系。 中间产物 米－曼氏方程式推导过程： ES的生成速率 = ES的分解速率 （二）Km与Vm是有意义的酶促反应动力学参数 Km值的推导 Km与Vmax的意义 Km与Vmax的意义 定义：Km等于酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度。 意义： Km是酶的特征性常数之一，只与酶的结构、底物和反应环境（如，温度、pH、离子强度）有关，与酶的浓度无关。 Km可近似表示酶对底物的亲和力； 同一酶对于不同底物有不同的Km值。 Vmax 1. 双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 二、底物足够时酶浓度对反应速率的影响呈直线关系 当[S]＞＞[E]，酶可被底物饱和的情况下，反应速率与酶浓度成正比。 关系式为：V = k3 [E] 三、温度对反应速率的影响具有双重性 温度对酶促反应速率具有双重影响。 酶促反应速率最快时反应体系的温度称为酶促反应的最适温度(optimum temperature)。 低于最适温度时，酶的活性随温度的下降而降低，但低温一般不使酶破坏。温度回升后，酶又恢复其活性。 所以可以运用低温保存酶制剂。 四、pH通过改变酶和底物分子解离状态影响反应速率 酶催化活性最高时反应体系的pH称为酶促反应的最适pH (optimum pH)。 五、抑制剂可逆地或不可逆地降低酶促反应速率 酶的抑制剂(inhibitor) （二） 可逆性抑制作用 抑制剂通常以非共价键与酶或酶-底物复合物可逆性结