酶促反应动力学-分析报告.ppt

有机分子 某些还原剂如Cys、GSH等 EDTA 具有蛋白质性质的大分子 无活性的酶原 激活作用 有活性的酶 * * 常见于多底物反应中 。 L-Phe等多种氨基酸对碱性磷酸酶的作用；肼类化合物抑制胃蛋白酶等。 Km的物理意义 Km值是当酶反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。 单位是底物浓度的单位，一般用mol/L或mmol／L表示。 计算：底物浓度—反应速度 底物浓度较低时， [S]《 Km，米氏方程式的分母中[S]一项可以忽略不计，得： 反应速度与底物浓度成正比， 符合一级反应。 在底物浓度很高时，[S]》Km，米氏方程中，Km可以忽略不计，得 反应速度与底物浓度无关， 符合零级反应——测定酶活力 1.3 米氏常数的意义 ① Km是酶的一个特征常数。 Km的大小只与酶的性质有关，而与酶浓度无关。 鉴别酶：25℃，最适pH的Km值 ② Km可以判断酶的专一性和天然底物。 酶的最适底物或天然底物： Km值最小的底物 酶对底物亲和力的大小：1/ Km 最适底物的亲和力（1/ Km）最大， Km最小,达最大反应速率一半时所需要的底物浓度愈小。 1.4 米氏常数的求法 双倒数作图法（Lineweaver-Burk作图法） 以1／[S]为横坐标， 以1／v为纵坐标作图 缺点： 实验点过于集中于直线的左端， 作图不易十分准确。 第二部分 酶的抑制作用 名词解释 米氏常数 Km，Michaelis-Menton constant 抑制作用 inhibition 可逆抑制作用 reversible inhibition 不可逆抑制作用 irreversible inhibition 竞争性抑制作用 competitive inhibition 非竞争性抑制作用 noncompetitive inhibition 反竞争性抑制作用 uncompetitive inhibition 2.1 酶的抑制作用 失活作用（inactivation） 酶蛋白变性而引起活力丧失。 变性剂对酶无选择性。 抑制作用（inhibition） 酶的必须基团化学性质的改变，引起酶活力降低或丧失。但酶未变性。 一种抑制剂只能使一种酶或一类酶产生抑制作用。 不可逆的抑制作用（irreversible inhibition）： 抑制剂与酶的必须基团以共价键结合而引起酶活力丧失，不能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活。 可逆的抑制作用（reversible inhibition） ： 抑制剂与酶的必须基团以非共价键结合而引起酶活力丧失，能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活。 可逆的抑制作用： 竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制。 2.2 分类—根据抑制剂与酶作用方式及是否可逆 2.3 竞争性抑制作用（competitive inhibition) ① 概念：抑制剂与底物竞争酶的结合部位，从而影响了底物与酶的正常结合。 最常见的一种可逆抑制作用。 ② 原因： 抑制剂与底物的结构类似，与酶可形成可逆的复合物，但此复合物不可能分解成产物，酶反应速率下降。 增加底物浓度可解除这种抑制。 动画 ③ 竞争性抑制的特征 a 反应式： 　　 b 动力学方面 : Vmax不变，但Km增大 。 ④ 竞争性抑制的临床应用意义 磺胺类药物：对氨基苯磺酰胺 磺胺类药物有抑制细菌生长繁殖的作用，而不伤害人和畜禽。 叶酸和二氢叶酸是四氢叶酸的前体。（二氢叶酸合成酶） PABA 人： 叶酸 （食物） FH2 FH4 叶酸还原酶 FH2还原酶 细菌： PABA FH2合成酶 FH2 FH4 FH2还原酶 对氨基苯磺胺与PABA两者竞争FH2合成酶 细菌： PABA FH2合成酶 FH2 FH4 抗菌增效剂TMP与FH2相似，抑制细菌FH2还原酶 细菌： PABA FH2合成酶 FH2 FH4 FH2还原酶 2.4 非竞争性抑制作用 （noncompetitive inhibition） ①概念：底物和抑制剂同时与酶结合，两者没有竞争作用。 抑制剂（I）和底物（S）可以同时结合在酶分子（E）的不同部位上，形成ESI三元复合物。但是，中间产物ESI三元复合物不能进一步分解为产物,酶活力降低。 动画 ②原因