原核基因的表达技术方案.ppt

原核基因的表达与调控 ZP230 引言 原核生物和单细胞真核生物没有核膜和明显的核结构，直接暴露在变幻莫测的环境中，本身既无足够的能源储备，又无高等植物那种制造有机物的本领，食物供应毫无保障，只有能根据环境条件的改变合成各种不同的蛋白质，使代谢过程适应环境的变化，才能维持自身的生存和繁衍。它有一套准确地调节基因表达和蛋白质合成的机制。 如果每个基因等同翻译，每一个多肽应有相同的拷贝数。 结论是否定的，基因的表达是被控制的。有些蛋白质的数目相当固定，另一些则变化很大；50种核糖体蛋白数量十分稳定。糖酵解体系的酶数目也极恒定。DNA聚合酶、RNA聚合酶等代谢过程中十分必需的酶或蛋白质（组成型或永久型合成合成蛋白）的合成速率不受环境变化或代谢状态的影响。 而另一种类型则被称为适应型或调节型(adaptive or regulated)，这类蛋白质的合成速率明显地受环境的影响而改变。 例如，一般情况下，一个大肠杆菌细胞中只有15个分子的β-半乳糖苷酶，但若将细胞培养在只含乳糖的培养基中，每个细胞中这个酶的量可高达几万个分子。其他参与糖代谢的酶，氨基酸、核苷酸合成系统的酶类，其合成速度和总量都随培养条件的变化而改变。 细菌必须迅速合成自身需要的蛋白质、核酸和其它生物大分子 ，而同时又能迅速停止合成和降解那些不再需要的成分。 原核生物的细胞结构以及基因表达的调控方式都是与这些要求相适应的。 7.1 原核基因表达调控总论 基因表达(gene expression)： 是指储存遗传信息的基因经过转录、翻译，产生有生物学功能的蛋白质的整个过程。即从DNA转录为mRNA再翻译为蛋白质的过程。 基因表达调控(gene regulation)： 对从DNA到mRNA再到蛋白质这个过程的调节就称为基因表达调控。 原核细胞基因的表达调控主要在转录水平上进行。 生物基因组的遗传信息并不是同时全部都表达出来的，大肠杆菌基因组含有约4000个基因，一般情况下只有5－10%在高水平转录状态，其它基因有的处于较低水平的表达，有的就暂时不表达。 不同组织细胞中不仅表达的基因数量不相同，而且基因表达的强度和种类也各不相同，这就是基因表达的组织特异性。 例如肝细胞中涉及编码鸟氨酸循环酶类的基因表达水平高于其它组织细胞，合成的某些酶(如精氨酸酶)为肝脏所特有；胰岛β细胞合成胰岛素；甲状腺滤泡旁细胞(C细胞)专一分泌降血钙素等。 细胞分化发育的不同时期，基因表达的情况是不相同的，这就是基因表达的阶段特异性。 一个受精卵含有发育成一个成熟个体的全部遗传信息，在个体发育分化的各个阶段，各种基因极为有序地表达，一般在胚胎时期基因开放的数量最多，随着分化发展，细胞中某些基因关闭、某些基因转向开放。 胚胎发育不同阶段、不同部位的细胞中开放的基因及其开放的程度不一样，合成蛋白质的种类和数量都不相同，显示出基因表达调控在空间和时间上极高的有序性，从而逐步生成形态与功能各不相同、极为协调、巧妙有序的组织脏器。 从上所述，不难看出： 生物的基因表达不是杂乱无章的，而是受着严密、精确调控的，不仅生命的遗传信息是生物生存所必需的，而且遗传信息的表达调控也是生命本质所在。 基因表达调控主要在两个水平上体现： (1)转录水平上的调控 (transcriptional regulation); (2)转录后水平上的调控(post- （transcriptional regulation)， 包括： ① mRNA加工成熟水平上的调控 ② 翻译水平上的调控 控制转录这一步反应是最有效的和最经济的。 原核生物中的操纵子系统就是这种最经济和最有效原则的体现。它把生物活性相关的基因组织在一起，就不必逐个进行调控，而是一开俱开，一关全关。 7.1.1 原核基因调控机制的类型与特点 原核生物的基因调控主要发生在转录水平上，根据调控机制的不同可分为负转录调控(negative transcription regulation) 正转录调控(Positive transcription regulation)。 负转录调控系统 负转录调控：调节基因产生阻遏蛋白(repressor) ，与操纵区结合阻止结构基因转录。作用部位是操纵区。 负控诱导： 阻遏蛋白不与诱导物结合时，阻遏蛋白与操纵区相结合，结构基因不转录，阻遏蛋白结合上诱导物时，阻遏蛋白与操纵区分离，结构基因转录。 负控阻遏：阻遏蛋白与效应物结合时，结构基因不转录。 正转录调控系统 正转录调控