预先静脉注射维生素C对家兔肠系膜上动脉—最新版重点解读.docVIP

机能学设计性实验 福建医科大学 2012级临床医学8中班 邱凉凉 陈志龙 尹哲 黄国堡 汪声祺 预先静脉注射维生素C对家兔肠系膜上动脉 缺血-再灌注损伤的保护作用 【目的和原理】 根据休克的缺血-再灌注损伤理论，通过静脉注射环磷酰胺封闭家兔肝脏网状内皮吞噬系统功能，24h后夹闭肠系膜上动脉若干时间，然后恢复血流灌注可造成小肠缺血-再灌注损伤，肠源性内毒素入血而发生休克[1]。研究表明，对组织造成损伤的主要因素，不是缺血本身，而是恢复血液供应后，产生大量的自由基攻击这部分重新获得血液供应的组织内细胞，造成肠内皮细胞保护屏障的损伤，肠道毛细血管通透性增高，肠粘膜损伤加重，并出现广泛上皮和绒毛分离，上皮坏死，引起肠道内细菌毒素入血，从而产生类似感染性休克的结果[2]。已有实验表明，维生素C具有很强的抗氧化（清除氧自由基）和降低肠道细菌易位发生率和易位量的作用，因此预先静脉注射维生素C可使超氧化物歧化酶(SOD)活性增高、血清丙二醛（MDA）含量下降[3]，起到保护肠粘膜屏障的作用。 基于以上原理，本实验旨在学习肠系膜上动脉闭塞性休克动物模型复制的方法，探讨维生素C对缺血—再灌注损伤休克的保护作用，从而进一步拓展维生素C的临床应用价值。 【实验动物】 家兔9只，体重2 kg以上，雌雄不拘。 【实验器材与药品】 RM6240多道生理信号采集处理系统或BL-420生物机能实验系统、压力换能器；手术台、急性动物实验动物手术器械、动脉夹、气管插管、三通管、30ml注射器、玻璃试管、可调节移液枪（100μl和1000μl）、滴管、秒表、纱布、细丝线；0.5%肝素钠生理盐水（625U/ml）、环磷酰胺、20%氨基甲酸乙酯溶液（或3%戊巴比妥钠溶液）、1%普鲁卡因溶液、显色基质鲎试剂盒、无热原的真空采血管、无热原试管等。 【实验步骤与观察项目】 1、手术操作 （1）术前动物处理：取家兔9只，随机分为三组，分别编号A、B、C，实验前24h各耳缘静脉注射环磷酰胺60mg/kg，禁食，自由饮水。 （2）麻醉与固定：家兔称重，耳缘静脉缓慢注射20%氨基甲酸乙酯溶液5ml/kg或3%戊巴比妥钠溶液1ml/kg麻醉动物，注射时应密切观察动物的肌张力、心跳、呼吸、瞳孔大小、角膜反射和皮肤夹捏的疼痛反映等。麻醉后将动物仰卧固定于手术台上，注意颈部要放正。 （3）气管插管：剪去颈部的毛，自甲状软骨到胸骨上方沿正中线切开皮肤及皮下组织（切口长约5cm），分离皮下组织和肌肉，暴露气管，气管下方穿一根丝线，在甲状软骨下方的气管上做一倒“T”形切口，插入气管插管后结扎固定。 （4）颈总动脉插管：分离左侧颈总动脉2~3cm，近心端用动脉夹夹闭，远心端（尽量靠近头端）用线结扎，在结扎下方剪一切口，向心脏方向插入注满0.5%肝素钠生理盐水的动脉插管，用另一丝线结扎固定。打开动脉夹，用注射器经三通管向动脉内注入0.5-1cm的0.5%肝素钠生理盐水，再旋转三通管的开关，使动脉插管与压力换能器相通，即可记录动脉血压。 （5）右颈总静脉插管：颈总静脉位置较浅，位于颈部肌肉外缘，用血管钳轻轻钝性分离并在下方穿两根丝线，结扎远心端，以结扎线作为牵引线提起颈总静脉，并将一手指垫在颈总静脉下。用眼科剪在近心端血管壁上呈45°角剪一小口，插入带三通开关、已充满生理盐水的静脉导管并深入至相当右心房位置（5~7cm，该长度需在插管前在导管上做标记），遇有阻力应往回退一小段，切不可硬插（易插破静脉进入胸腔）。此时旋动三通管开关，使静脉插管与压力换能器相通，即可测得中心静脉压，观察插管是否成功。若导管插管成功，则可见中心静脉压数值在0~12cmH2O范围并随呼吸而上下波动，结扎固定。三通管连上输液瓶，不测压时使导管与输液管相通，缓慢输入生理盐水（5~10滴/分），保持静脉通畅。 （6）暴露肠系膜上动脉：自剑突下1.5cm起沿腹正中线向下做一个正中切口，切口长约8cm，打开腹腔后，用温生理盐水纱布将内脏轻轻推向左前方，暴露出脊柱和腹膜后组织、在脊柱稍右可见黄色的右肾上腺，于右肾上腺右上方可见肠系膜上动脉，用血管钳钝性分离周围组织，然后在肠系膜上动脉穿线备用。 （7）B组轻轻提起肠系膜上动脉的穿线，用动脉夹夹闭肠系膜上动脉60min后,除去动脉夹，分别在松开动脉夹后0min、5min、15min、30min、60min、90min、120min于家兔耳中央动脉采血2ml置于含肝素钠抗凝剂的无热原试管中待用,并描记颈动脉血压曲线同时观察血压变化；A组仅暴露但不夹闭肠系膜上动脉，取血与描记颈动脉血压曲线操作与B组同；C组于动脉夹松开前15min（即夹闭后的第45min）由三通管注射维生素C 0.500g/kg（浓度为0.300mg