RNA干扰抑制FUBP1基因表达对人胃癌细胞系SGC7901生物学功能的影响.docVIP

·中文论著摘要· RNA干扰抑制FUBP1基因表达对人胃癌细胞系SGC7901生物学功能的影响 南方医科大学 刘一柏 目 的 构建针对靶向基因FUBP1（far upstream element binding protein 1，FUBP1）的慢病毒载体LV-FUBP1-RNAi，转染胃癌SGC-7901细胞，探讨应用RNA干扰技术抑制FUBP1基因的表达对人胃癌细胞增殖、细胞迁移、细胞周期和凋亡等生物学功能的影响，初步评价FUBP1基因沉默在胃癌基因治疗中的应用价值。 方 法 构建三组不同RNA干扰序列的慢病毒载体LV-FUBP1-RNAi及阴性对照序列的慢病毒载体Negative-RNAi，通过慢病毒转染预实验选择合适的感染复数分别转染胃癌细胞SGC7901后利用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(QRT-PCR)检测FUBP1在mRNA的表达水平，筛选出有效的RNA干扰序列用于后续实验。将实验分为FUBP1-RNAi组、Negative-RNAi阴性对照组（标记为NC）和空白对照组（标记为CON），应用QRT-PCR 及蛋白免疫印迹（Western blot）检测FUBP1在mRNA和蛋白质水平的表达量。应用CCK-8法检测各组细胞增殖、Transwell及划痕实验检测各组细胞迁移能力、流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况及细胞凋亡。 结 果 成功构建了三组不同RNA干扰序列