青霉素的生产工艺流程张兴旺剖析.ppt

* 包头轻工职业技术学院 生物制药的生产工艺 主讲人：杨紫 团队人员：张鑫、汪洋 知识目标： 掌握?-内酰胺类抗生素的理化性质 掌握发酵生产青霉素的条件控制，及青霉素提取与精制的控制点。 能力目标： 通过实训，熟悉工业生产青霉素的工艺流程并熟悉基本操作 重点:掌握发酵生产青霉素的工艺流程 难点:青霉素提取与精制的控制点 青霉素 青霉素 又被称为青霉素G、青霉素钠、苄青霉素钠、青霉素钾、苄青霉素钾等。青霉素是抗菌素的一种，能破坏细菌的细胞壁（革兰氏阳性菌）并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素，是第一种能够治疗人类疾病的抗生素。青霉素是β-内酰胺类抗生素的典型代表。 青霉素结构 ?-内酰胺类抗生素是分子中含有?-内酰胺环的一类天然和半合成抗生素的总称。 作用机制 细胞壁合成中的肽多糖合成的第三阶段 肽多糖的D-丙氨酰-D-丙氨酸二肽类似物 竞争性与转肽酶结合，使转肽酶不能催化多肽链之间的交联。 生长中的细胞有效，静止细胞无效 高效、安全的抗细菌感染药物 临床应用 （1）临床抗感染治疗：大多数革兰氏阳性菌和某些革兰氏阴性细菌及螺旋体等。 毒性小，但需要皮试。 （2）各种半合成抗生素的原料： 氨苄青霉素，磺苄青霉素，乙氧萘青霉素，头孢菌素母核。 青霉素的性质 1、稳定性 固体青霉素盐的稳定性与其含水量和纯度有很大的关系； 2、溶解度 青霉素游离酸在水中溶解度很小，易溶于有机溶剂如醋酸乙酯、苯、氯仿、丙酮和乙醚中，而其钾盐、钠盐易溶于水和甲醇，可溶于乙醇 3、降解反应： 青霉素是很不稳定的化合物，遇酸碱或加热易分解而失去活性，并发生分子重排。 4、紫外吸收 5、过敏反应 青霉素生产菌的生物特性： 产黄青霉：Penicilliumchrosogenum 孢子:绿色和黄色 菌落：平坦或皱褶，圆形 青霉穗:分生孢子链状 深层培养菌丝：球状和丝状两种。 青霉素发酵工艺 1.发酵工艺流程 （a）最早发现的产生青霉素的 原始菌种是点青霉菌，生产能力 很低，不能满足工业生产要求， 所以被淘汰。现在主要采用的的 产黄青霉菌。 （b）为了提高产黄青霉的青霉素产量 使用的诱变剂如：二环氧丁烷、 甲磺酸乙酯、乙烯亚胺、亚硝酸、 X射线等。 （1）菌种： （2）孢子制备 将沙土孢子先在用甘油、葡萄糖、蛋白胨组成的培养基进行斜面培养，经传代活化。最适生长温度25~26oC，培养6~8天，得单菌落，再传斜面，培养7天，制得斜面孢子。再移植到优质小米或大米固体培养基上，25oC，相对湿度45%-50%，生长7天，制得小米孢子。孢子成熟后进行真空干燥，低温保存备用。 种子罐培养工艺 一级种子发酵：发芽罐，孢子萌发，形成菌丝。 培养基：葡萄糖，玉米浆，碳酸钙，玉米油 消沫剂等； 接种量:200亿孢子/t培养基 空气流量: 1：3（m3 / m3 ·min）； 搅拌转速:300-350r/min； pH:自然； 温度：25±0.5℃ ； 时间: 68h。 二级种子罐：繁殖罐，大量繁殖。 培养基：葡萄糖、玉米浆，玉米油，消沫剂等； 接种量：10％； 空气流量：1:1-1.5 （m3 / m3 ·min）； 搅拌转速：250-280r/min； pH：自然； 温度：25±1℃； 时间： 180-193h； 生产罐培养工艺 三级罐：生产罐； 培养基： 花生饼粉，葡萄糖，硫酸铵， 硫代硫酸钠，苯乙酰胺，CaCO3, 玉米油. 温度控制 适宜菌丝生长温度一般为25oC，分泌青霉素20℃ 20℃青霉素破坏少，周期很长。 变温控制，不同阶段不同温度。 生长阶段:较高温度，缩短生长时间；生产阶段适当降低温度，以利于青霉素合成。 前期控制25℃左右，后期降温控制22℃ pH控制 合成适宜pH6.4－6.6左右，避免超过7.0 直接加酸或碱：自动控制 流加葡萄糖：恒速；变速，依赖pH变化快慢。 pH下降：补加CaCO3、通氨、尿素或提高通 气量 pH上升：补加糖、生理酸性物质（硫酸铵、油脂） 恒速补糖，用酸或碱控制 方式 根据pH补糖 溶氧控制 ＜30％饱和度，产率急剧下降； ＜10％，造成不可逆的损害。 临界溶氧浓度：30％。 通气比：1：0.8－1.5 。 适宜的搅拌速度:保证气液混合，提高溶氧 各阶段的供氧比较