二、从自然界或现.pptVIP

二、从自然界或现有菌种中分离筛选菌种 （一）采样 （二）增殖培养? （三）纯种分离及纯培养 （四）生产性能测定 （一）采样 1．选择采样地点 2．确定采样时间 3．采样 1．选择采样地点 以采集土壤为主。一般在有机质较多的肥沃土壤中，微生物的数量最多，中性偏碱的土壤以细菌和放线菌为主，酸性红土壤及森林土壤中霉菌较多，果园、菜园和野果生长区等富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多。 2．确定采样时间 采样应充分考虑采样的季节性和时间因素，以温度适中，雨量不多的秋初为好。 如在夏季或冬季土壤中微生物存活数量较少，暴雨后土壤中微生物也会显著减少。 3．采样 在合适的时间选好适当地点，用无菌刮铲、土样采集器等，采集有代表性的样品。具体采集土样时，就森林、旱地、草地而言，可先掘洞，由土壤自下向上层顺序采集；就水田等浸水土壤而言，一般是在不损土层结构的情况下插入圆筒采集。如果层次要求不严格，可取离地面50～150mm处的土。将采集到的土样盛入清洁的聚乙烯袋、牛皮纸袋或玻璃瓶中。采好的样品必须完整地标明样品的种类、采集日期、地点以及采集地点的地理、生态参数等。采好的样品应及时处理，暂不能处理的应在4℃条件下贮存，但贮存时间不宜过长。这是因为一旦采样结束，试样中的微生物群体就脱离了原来的生态环境，其内部生态环境就会发生变化，微生物群体之间就会出现消长。 （二）增殖培养 1．控制培养基中碳源的种类 在选择碳源时根据微生物利用碳源的特点，可选定糖、淀粉、纤维素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源，那么只有能利用这种碳源的微生物才能大量正常生长，而其他微生物就可能死亡或被淘汰。 2．添加某些抑制或促进因子 在分离细菌时，培养基中添加浓度一般为50μg／mL的抗真菌剂(如放线菌酮和制霉素)，可以抑制真菌的生长。在分离放线菌时，通常于培养基中加入1～5mL天然浸出汁(植物、岩石、有机混合腐质等的浸出汁)?作为最初分离的促进因子，由此可以分离出更多不同类型的放线菌。 3．控制培养条件 在分离梭状芽孢杆菌时，可利用该菌的厌氧特性，控制为厌氧培养环境，这样好氧菌就不易生长而受到抑制，只有厌氧菌可以优势生长。 （三）纯种分离及纯培养 1．稀释分离法 将样品进行适当稀释，然后将稀释液涂布接种于培养基平板上进行培养，待长出独立的单个菌落，进行挑选分离。 2．划线分离法 要首先铺制培养基平板，然后用接种针（接种环）挑取样品，在平板上划线。划线方法可用分步划线法或一次划线法，无论用哪种方法，基本原则是确保培养出单个菌落。 3．组织分离法 主要用于食用菌菌种或某些植物病原菌的分离。分离时，首先用10%漂白粉或0.1%升汞液对植物或器官组织进行表面消毒，用无菌水洗涤数次后，将一小块组织移植到固体培养基表面，于适宜温度培养数天后，可见微生物向组织块周围扩展生长。经菌落特征和细胞特征观察确认后，即可由菌落边缘挑取部分菌种进行纯培养。对于有些微生物如毛霉、根霉等在分离时，由于其菌丝的蔓延性，极易生长成片，很难挑取单菌落。常在培养基中添加0.1%的去氧胆酸钠或在察氏培养基中添加0.1%的山梨糖及0.01%的蔗糖，这些做法均利于单菌落的形成。? （四）生产性能测定 这种从自然界中分离得到的纯种称为野生型菌株，它只是筛选的第一步，所得菌种是否具有生产上的实用价值，能否作为生产菌株，还必须采用与生产相近的培养基和培养条件，通过三角瓶进行小型发酵试验，以求得到适合于工业生产用的菌种。如果所得到的野生型菌株产量偏低，达不到工业生产的要求，仍可以保留作为菌种选育的出发菌株。 三、微生物菌种的自然选育 在应用微生物加工制造和发酵生产各种产品的过程中，要想有效地大幅度提高产品的产量、质量和增加品种，往往需要通过选育优良的生产菌种才能达到目的。而经过分离筛选获得的菌种，一般不能立即适应实际生产需要，还要通过选育，才能提高代谢产物的产量、改进产品质量、简化工艺、提高产品附加值。 优良菌种的选育是在微生物遗传变异的基础上进行的。遗传和变异是相互关联，同时又相互矛盾对立的两个方面，在一定条件下，二者是相互转化的。认识和掌握微生物遗传变异的规律是搞好菌种选育的关键。 根据微生物遗传变异的特点，人们在生产实践中已经试验出一套行之有效的微生物育种方法。育种的手段很多，主要包括自然选育、诱变育种、杂交育种、原生质体融合、基因工程等。 四、微生物菌种的诱变选育 （一）诱变育种的一般步骤 （二）营养缺陷型突变菌株的筛选 （一）诱变育种的一般步骤 1．选择出发菌种 2．同步培养 3．制备单细胞或单孢子菌悬液 4．诱变处理 5．筛选变异菌株 1．选择出发菌种 出发菌种是指用于诱变的原始菌种。出发菌种可以是从自然界的土样或水样中分离出来的野生型菌种；也可以是生产中正在使用的菌种；还