第6章 蛋白质结构与功能关系.pptVIP

1. 概念： 多克隆抗体：简称多抗，是识别一个蛋白质的不同部分的多种抗体的混合物。例如，向一个动物注入一种蛋白质后，B淋巴细胞群中每个细胞产生结合抗原中特异的不同抗原决定簇的抗体。 单克隆抗体：简称单抗，是由生长在细胞培养物中的同一B细胞的群体合成并分泌的，这些抗体是均一的，所有抗体识别同一的表位。 2. 典型的利用抗原-抗体相互作用的生物分析方法 ELISA：酶联免疫吸附测定 Western：免疫印迹 酶联接免疫吸附测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ,ELISA) 待测蛋白、抗原（例如，含有HIV抗原的血清） 一级抗体 二级抗体 Western blot(免疫印迹) * Figure: 14-14b Title: Investigation of Hemoglobin Caption: Investigation of hemoglobin derived from HbAHbA and HbSHbS individuals by using electrophoresis, protein fingerprinting, and amino acid analysis. Hemoglobin from individuals with sickle-cell anemia (HbSHbS) (a) migrates differently in an electrophoretic field, (b) shows an altered peptide in fingerprint analysis, and (c) shows an altered amino acid, valine, at the sixth position in the Beta chain. During electrophoresis, heterozygotes (HbAHbS) reveal both forms of hemoglobin. * * 蛋白质的结构与功能的关系 肌红蛋白(myoglobin)的结构与功能 五十年代，John Kendrew用X衍射对抹香鲸肌红蛋白的三级结构研究获得成功，第一个获得完整构象的蛋白质。1962年Kendrew和Perutz由于测定了肌红蛋白及血红蛋白的高级结构而获Nobel化学奖。 肌红蛋白(myoglobin)是哺乳动物细胞主要是肌细胞贮存和分配氧的蛋白质，由一条153aa的多肽链和一个血红素辅基组成。除去血红素的脱辅基肌红蛋白称珠蛋白。 肌红蛋白由8段直的α螺旋组成，命名为A、B、C……H，~80%的氨基酸都处于α螺旋中。8个α螺旋大体上组成2层， α螺旋的拐弯处由1-8个aa组成的无规卷曲，C末端也有一段5个aa的松散肽链；肌红蛋白的4个Pro各自处于一个拐弯处； 亲水氨基酸在分子表面，疏水氨基酸在分子内部，是可溶性蛋白。分子内部具有一个能容纳4个水分子大小的疏水空间。 1. 肌红蛋白的三维结构 某些过渡金属的低氧态（Fe2+，Cu+）具有很强的氧结合倾向 因此Fe(II)在肌红蛋白和血红蛋白中由原卟啉Ⅸ的有机分子固定 原卟啉环Ⅸ由4个卟啉环通过甲叉桥连接成四吡咯环系统，再连有4个甲基、2个乙烯基、2个丙酸基。 铁卟啉称为血红素(heme)，使血液呈红色 与Fe2+血红色结合的Mb为亚铁Mb，与Fe3+血红色结合的Mb为高铁Mb 2. 辅基血红素： Fe2+有6个配位键，其中4个和吡咯环的N配位结合，另外第5与第6配位键与卟啉环面垂直。其中第5配位键与第93位（F8）His结合，第6配位键结合O2（64位，E7His）；高铁Mb中第6位氧结合部位失活，H2O分子填空该部位 Fe-O键不是垂直于吡咯环这是由于远侧组氨酸的空间位阻效应。这种位阻决定了一些重要生化性质： 近侧组氨酸 远侧组氨酸 3. O2与肌红蛋白的结合 游离铁卟啉结合CO比结合O2强25000倍，由于空间位阻效应，在肌红蛋白中血红素与CO的亲和力仅比O2大约250倍。因为Fe 与CO的直线结合受到E7组氨酸的空间位阻。这种作用可以防止生物代谢过程中产生的CO与O2竞争结合肌红蛋白和血红蛋白。 游离的亚铁血红素容易被氧化成高铁血红色，但是肌红蛋白及血红蛋白多肽微环境具有保护作用：固定血红素；疏水环境保护血红素免受氧化；为O2分子提供一个适合的结合部位。 血红蛋白(hemoglobin)的结构与功能 血红蛋白(Hb)的三维结构 Hb为球状寡聚蛋白，由α2β2四个亚基(珠蛋白)和血红素组成，每个亚基都有一个血红素基和一个氧结合部位，分子量65000，α 链141个残基，β链146个残基。亲水性侧链基团在分子表面，疏水性基团在分子内部。 与肌红蛋白相比，血红蛋