3植物组织培养的基本技术解说.pptVIP

3 植物组织培养的基本技术 培养基的种类 培养基的成分 培养基的选择 3.1培养基的种类 、配制 ＭＳ培养基 Ｂ5培养基 Ｗhite培养基 Ｎ6培养基 ＫＭ－８Ｐ培养基 ＭＳ培养基为Ｍurashige和Ｓkoog缩写，二人于1962年为培养烟草细胞而设计的。 特点：无机盐离子浓度较高，硝酸盐较高，为较稳定的平衡溶液。 适用： 广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。 是1968年由ＧamBorg等为培养大豆根细胞而设计的。 特点：含有较低的铵，这可能对不少培养物的生长有抑制作用。 适用：如双子叶植物特别是其中的木本植物。 Ｗhite培养基 是1943年由Ｗhite为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良，称作Ｗhite改良培养基，提高了ＭgＳＯ4 的浓度和增加了硼素。 特点：无机盐数量较低。 适用：生根培养。 Ｎ6培养基 Ｎ6培养基是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。 特点：成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。 适用：广泛应用于小麦、水稻及其它植物的花药培养等。 ＫＭ－８Ｐ培养基 ＫＭ－８Ｐ培养基是1974年为原生质体培养而设计的。 特点：有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素。 适用：原生质融合的培养。 培养基的成分 以MS培养为例，其成分可以分为水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料 。 1.水 ：原生质体的组成成分，代谢过程的介质和溶媒。配制培养基母液时要用蒸馏水，配培养基时可用自来水，但在少量研究上尽量用蒸馏水。 2.无机元素 ： （1） 大量元素，指浓度大于0.5mmol/l的元素，有Ｎ、Ｐ、Ｋ、Ｃa、Ｍg、Ｓ等。 N ：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，是生命结构和功能物质不可缺少的。供应的物质有ＫＮＯ3、 ＮＨ4ＮＯ3等。（ＮＨ4－N对植物生长较为有利。 ） P ：组织培养中，磷不仅增加养分、提供能量，而且也促进对Ｎ的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。供应形式：ＫＨ2ＰＯ4或ＮaＨ2ＰＯ4等。 K ：Ｋ对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系，它具有活化酶的作用。另外对胚的分化有促进作用。但浓度不易过大，一般为１～３mg/l为好（ＫＣl、ＫＮＯ3 ）。 Ｍg、Ｓ和Ｃa ：Ｍg是叶绿素的组成成分，又是酶的活化剂；Ｓ是含硫氨基酸所构成蛋白质的组成成分。Ｃa 是构成细胞壁的一种成分，Ｃa对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用（ＭgＳＯ4·7Ｈ2Ｏ和ＣaＣl2·２Ｈ2Ｏ）。 （2）微量元素：指小于0.5mmol/l的元素， Ｆe、Ｂ、Ｍn、Ｃu、Ｍo、Ｃo等。 功能：铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。同时又是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用。 因其在pH５.２以上，易形成Fe(OH)3的不溶性沉淀，故用Ｆe ＳＯ4·７Ｈ2Ｏ和 Ｎa2-EDTA结合成螯合物使用。 3.有机化合物 ： (1)碳水化合物 供应形式：最常用蔗糖，葡萄糖和果糖也较好，麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖也有应用。 使用浓度：2-3%，常用3%，有时可用2.5%，但在胚培养时采用４～１５％的高浓度，因蔗糖对胚状体的发育起重要作用。 在大规模生产时，可用食用的绵白糖代替。 （2）维生素 种类：主要有VB1 （盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、VC(抗坏血酸) 、烟酸，有时还使用生物素、叶酸、VB2等。一般用量为0.1～1.0mg/l。 功能：以各种辅酶的形式参与多种代谢活动，促进生长、分化作用。VB1对愈伤组织的产生和生活力有重要作用，VB6能促进根的生长， Vpp与植物代谢和胚的发育有一定关系。 VC有防止组织变褐的作用。 （3）肌醇（环己六醇） 功能：参与构建细胞壁。由磷酸葡萄糖转化而来，进一步生成果胶物质。 能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。促进组织和细胞的繁殖、分化。 使用浓度：一般为１００mg/l。 (4)氨基酸　　 功能：作为有机氮源，利于被细胞直接吸收利用。 常用种类：甘氨酸，其它如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。 （5）天然复合物：对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。 ①椰乳 ：一般使用浓度在10-20％。 功能：在愈伤组织和细胞培养中有促进作用。在马铃薯茎尖分生组织和草莓微茎尖培养中起明显的促进作用，但茎尖组织的大小若超过１mm时，椰乳就不发生作用。 其它②马铃薯③水解酪蛋白④酵母提取液（ＹＥ）（０.０１～０.０５％）。 4.植物激素 5.培养材料的支