8赵家杰卵磷脂的提取.docVIP

卵磷脂的提取 班级学号：0820651班26号（程永刚），27号（付朝迁），28号（范卿林），29号（赵家杰） 一：实验简介 磷脂是生物体组织细胞的重要成分，主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心等组织中，尤其在蛋黄中含量较多(10%左右)。卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性质可将其与中性脂肪分离开；此外，卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶，利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。 ％％％℃）洗条，搅拌1h ，再用丙酮反复研洗，直到丙酮洗液为近无色为止，得到的白色蜡状的卵磷脂，然后干燥，称得干重。 五:卵磷脂的含量测定也鉴定 1:磷脂含量测定： 方法 一　钼蓝比色法 一、实验原理 将含磷脂试样加氧化锌高温灼烧，使有机磷转变成无机磷，即以磷酸盐的形式(磷酸锌为主)留存在灰分中。加酸溶解灰分，使生成的磷酸根离子与钼酸钠作用生成磷钼酸钠，遇硫酸联氨被还原成蓝色的络合物钼蓝。产生蓝色的深度与磷的含量成正比。将被测液与磷标准液在相同条件下比色定量。以磷的含量乘以适当的换算系数，即得磷脂的含量。 二、仪器和试剂 1、仪器：瓷坩锅或石英坩锅、分光光度计或带塞的50mL比色管、电炉、高温炉、恒温水浴、分析天平（感量0.001g）、移液管（5、10mL）、容量瓶（100、500、1000mL）、表面皿、 烧杯、量筒、漏斗、滤纸、坩锅钳、试剂瓶。 2、试剂： （1）50%的氢氧化钾溶液； （2）0.015%硫酸联氨溶液（w/v）； （3）2.5%钼酸钠稀硫酸液：量取140mL硫酸滴加到300mL水中，摇匀，冷却至室温，加入12.5g钼酸钠，溶解后加水定容至500mL，摇匀，静置24小时备用。 （4）磷标准溶液 ：称取无水磷酸二氢钾0.4391g，加水溶解并定容于1000mL水中（含磷0.1mg/mL）。 吸取10mL 0.1mg/mL的磷标准溶液于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度（含磷0.01mg/mL）。 （5）其它：盐酸、硫酸、氧化锌。 三、实验步骤 1、绘制标准曲线 分别准确吸取0.01mg/mL磷标准1.0，2.0，4.0，6.0，8.0mL于50mL比色管中，再分别加水至10mL；再各加入8.0mL 0.015%硫酸联氨溶液、2.0mL钼酸钠稀硫酸溶液，加塞、摇匀。然后去塞，将5只管置于沸腾的水浴中加热10min，取出冷却至室温，加水稀释至50mL，充分摇匀，经10min后，以水调零，用3cm比色皿于分光光度计上在650nm波长处，分别测定吸光度。以吸光度为纵坐标，以磷量（0.01, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08mg）为横坐标绘制标准曲线。 2、制备被测液 用坩锅称取试样约10g（准确至0.001g），加氧化锌0.5g，先在电炉上加热炭化，然后送入550～600℃的高温炉中灼烧至灰化（呈白色），灼烧时间约2小时，取出坩锅冷却至室温，用热盐酸（1:1）10mL溶解灰分，并加热微沸5分钟，将溶解液过滤至100mL容量瓶中，用热水冲洗坩埚和滤纸，待滤液冷却至室温后，用50%氢氧化钾溶液中和至出现混浊，缓慢滴加盐酸使氧化锌沉淀全部溶解后，再滴2滴，最后用水稀释至刻度，摇匀。 3、样品测定 用移液管吸取被测液10mL注入50mL比色管中，加入8.0mL 0.015%硫酸联氨，加2.0mL钼酸钠稀硫酸溶液，加塞，摇匀。然后去塞，将比色管置于沸腾的水浴中加热10min，取出冷却至室温，加水稀释至50mL，充分摇匀，10min后在分光光度计上于650nm波长处，同标准曲线一样测定吸光度。 四、结果计算 根据被测液的吸光度值，从标准曲线查得磷量（P），按公式计算磷脂含量： 式中： P —— 从标准曲线查得的磷量(mg)； V2 —— 样品灰化后稀释的体积(mL)； V1 —— 比色时所取的被测液体积(mL)； 26.31— 每毫克磷相当于磷脂的毫克数； W —— 试样重量(g)。 方法二 重量法 一、实验原理 磷脂吸水膨胀后比重增大，所形成的絮状悬浮物不溶于油脂而为沉淀物，从而能和油脂分离。磷脂又具有不溶于丙酮的特性，用丙酮洗涤沉淀，所得沉淀物放入105℃烘箱中烘至恒重，即得到无水磷脂。 二、仪器和试剂 仪器: 玻璃漏斗、漏斗架、烧杯100mL、锥形瓶、滤纸、天平（感量0.001g）、电热烘箱; 试剂: 丙酮 三、操作步骤 1、取混匀试样100mL，加热约90℃时进行过滤。 2、用烧杯称取试样25g，加热至80℃后，加入2～2.5mL水，充分搅拌使之水化，在室温下静置过夜，或进行离心沉淀。 3、倾出上层清液，用已经恒重的滤纸进行过滤（或用抽气装置抽滤）。待滤液全部滤出后，用冷丙