第八章体内中药制剂解说.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 三、实验方案 1．给药方案 20名受试者随机分为两组，每组10人 第1次试验—第一组口服受试制剂(相当于环丙沙星500mg)，第二组口服相同剂量的参比制剂 第2次试验—第1次服药后第7天开始，两组交换给药 * 体内药物分析 * 2．血样的采集与处理 分别口服给药前和给药后0.25、0.5、1.0、1.5(tmax)、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0和24.0(5～7个t1/2)小时 由肘正中静脉取血 4 ml 立即移入经肝素处理的离心试管中，静置5分钟后，离心15分钟(3000rpm)，分离血浆，-20℃冰箱中保存待测 * 体内药物分析 * 3．血样分析法 色谱条件 —高效液相色谱仪(包括LC-10ATvp泵，RF-530荧光检测器)；色谱柱为Kromasil ODS-AP(200mm×4.6 mm，5?m) —流动相为乙腈-0.025mol/L磷酸溶液(86:14)，流速1.0ml/min —检测波长为?ex=277nm，?em=445nm —柱温为40℃。 * 体内药物分析 * 3．血样分析法 血浆样品的预处理 取血浆0.5ml，加内标溶液(10?g/ml诺氟沙星甲醇溶液）50 ?l、乙腈1.0ml，涡旋混合30s，离心5min，取上清液1ml，加二氯甲烷-异丙醇(95:5)混合溶剂5ml，涡旋振荡1min，离心5min，弃去上层水相，吸取下层有机相，60℃下氮气流吹干，残渣加流动相200?l，涡旋溶解30s，离心5min，取上清液20?l进样 * 体内药物分析 * 四、分析方法验证 1．方法特异性 环丙沙星峰tR=12.4min，诺氟沙星(内标物质)tR=10.9min，各峰均获得完全分离，内源性物质峰(与空白血浆样品一致)tR=8.6min对测定无干扰。志愿者用药后的血浆样品色谱图中环丙沙星与内标物质峰与模拟血浆样品中环丙沙星与内标物质峰的tR、T、n和R均一致，峰形相同。故不认为代谢物有干扰 * 体内药物分析 * 2．标准曲线 标准系列溶液——取盐酸环丙沙星，加水制成1、2、5、10、20和50?g/ml的标准系列溶液，冰箱保存 标准系列模拟血浆样品——取空白血浆0.5ml，加环丙沙星标准系列溶液各50?l，配制成相当于浓度为0.1，0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 ?g/ml的QC样品，冰冻(-20℃) 测定法——取QC样品，照“血浆样品的预处理”项下方法操作，以环丙沙星浓度C为横坐标，环丙沙星与内标物质的峰面积比值Y为纵坐标，用加权最小二乘法经Excel运算，求得的直线回归方程为：Y=1.33·C-0.02583，R2=0.9951(C=0.1～5.0 ?g/ml) 3．方法精密度与准确度 QC样品—浓度为 0.1、0.5 和 2.0 ?g/ml 分析批次—3批，每批 5 样品 测得浓度—0.0988、0.4537 和 2.128 ?g/ml 准确度RE(%)—-1.2%、-9.3% 和 6.4% 精密度 批内(%)—6.7%、4.6% 和 3.9% 批间(%)—8.9%、9.6% 和 12.3% * 体内药物分析 * 第四章 分析方法的建立与验证 第三节 分析方法的验证与要求 * 体内药物分析 * 4．方法定量限 受试制剂和参比制剂的Cmax分别为 —3.202?0.496和3.300?0.730 ?g/ml 方法的LOQ为0.1 ?g/ml＜ 0.16 ?g/ml (Cmax的1/20) —准确度和精密度均符合要求：RE为-1.2% 日内RSD为 6.7% 日间RSD为 8.9% * 体内药物分析 * 第四章 分析方法的建立与验证 第三节 分析方法的验证与要求 表4-2 血浆中环丙沙星HPLC测定法的准确度与精密度考察结果 分析批次 加入量（ng/ml） 100.0 500.0 2000 1 100.8 457.1 2179.6 95.7 451.0 2212.1 105.4 438.0 2084.9 105.1 447.1 2129.3 104.3 449.0 2190.1 106.4 469.4 2135.2 2 96.9 465.7 2168.1 98.5 497.9 2192.6 95.7 468.1 2207.1 105.9 487.8 2251.3 95.8 456.8 2252.2 86.3