第10章遗传重组和转座子剖析.ppt

* Transposons of the TnA family have inverted terminal repeats, an internal res site, and three known genes. * Figure 15.4 The direct repeats of target DNA flanking a transposon are generated by the introduction of staggered cuts whose protruding ends are linked to the transposon. * Two promoters in opposite orientation lie near the outside boundary of IS10R. The strong promoter POUT sponsors transcription toward the flanking host DNA. The weaker promoter PIN causes transcription of an RNA that extends the length of IS10R and is translated into the transposase. * Two promoters in opposite orientation lie near the outside boundary of IS10R. The strong promoter POUT sponsors transcription toward the flanking host DNA. The weaker promoter PIN causes transcription of an RNA that extends the length of IS10R and is translated into the transposase. 两大步 a) 共合体形成 切口－连接－复制 b) 拆分 靶位点的DR形成 2、非复制型转座模式 供体上最终产生双链断裂 供体位点如不能被修复则有致死效应 3、保守型转座模式 另一种非复制型 与λ整合机制相似 其转座酶与λ整合酶家族有关 4、TnA转座模式 ? 复制型转座 转座酶(tnpA)、 解离酶(tnpR) ? 解离酶需要特异的内 部位点 双重功能：解离功能 tnpA及自身的阻遏物 ? 拆分位点 –res 共合体拆分位点 ? 转座结果产生5bp 的正向重复序列 四、转座子转座频率的调控 ? 每个转座子控制自身转座的核心----控制转座酶的水平 不到一个转座酶分子／世代／细胞 1、Tn10转座机制 ? Tn10为复合型转座子 ? IS10R元件提供转座酶活性-----合成转座酶的序列 ? 自发转座频率---10－7 ? Tn10转座酶水平是控制转座的关键 ? 有两种控制转座的方式 a） 通过反义RNA的翻译水平控制 ? IS10R外侧边缘两个启动子 ? PIN控制IS10R的转录 弱启动子 ? POUT—强启动子 右向转录宿主DNA ? INRNA和OUTRNA 有36bp的重叠 稳定性： OUTRNA??INRNA ? 大量OUTRNA作为 INRNA的反义RNA b） 甲基化作用控制转座酶合成及其与DNA的结合 ? Tn10转座酶启动子含有GATC序列（其它转座子） ? E.coli中Dam甲基化酶 作用使启动子相对钝化 只能利用刚刚复制完成 时出现少数转座酶 ? 此外，IS10R的末端 IR也含有GATC， 甲基化的GATC不能 结合转座酶 ? Tn10在DNA刚刚 复制后发生转座 10.4.3　果蝇的转座子 “ 杂种不育”（hybrid dysgenesis）。 M（♂）×P（♀） 后代可育 P（♂）×M（♀） 后代不育。 10.4.3.1P因子与杂种不育 转座酶 M 10.4.3.2　FB因子 10.4.4 转座的遗传学效应 （1）插入突变/失活或改变基因表达的模式； （2）插入位置上出现新基因（ampR、terR等） ； （3）改变染色质的结构（缺失、倒位等）； （4）产生不稳定的新的突变； （5）外显子改组； （6）产生新的变异，有利于进化。 转座子的利用 转基因载体等 转座子标签法——以转座子