第八章 植物细胞培养及次生物质生产剖析.ppt

适合植物细胞悬浮培养的生物反应器的特点： 合适的氧传递； 良好的流动性； 较低的剪切力。 * 结构最为简单，所体从底部通过喷嘴或孔盘穿过液池实现气体交换和物质传递整个系统密闭，易于无菌操作，培养过程中无需机械能损耗，适合培养对剪切力敏感的植物细胞。对于黏度大及高密谋的培养体系此类反应器的混合效率较低。 * * * 生长偶联型 产物合成与细胞生长成正比，如长春花中长春花碱的合成、烟草细胞烟碱合成、薯蓣中薯蓣皂甙的合成。 中间型 产物仅在细胞生长下降时合成，细胞处于指数生长期或停止生长产物都不合成，蒽醌类物质合成的植物细胞、莨菪烷类合成的植物细胞等属于此类型。 非生长偶联型 产物合成在细胞生长停止以后。如紫草宁。 * 典型的流化床生物反应器是利用流体的能量来悬浮颗粒的。如图是流化床细胞反应器。由于使颗粒呈流化状态所需的能量与颗粒大小成正比，因此，通常采用小固定化颗粒，这些小颗粒良好的传质特性是流化床反应器的主要优点。流化床生物反应器的最大缺点是剪切和颗粒碰撞会损坏固定化细胞 。 * 指在植物细胞培养体系中加入水溶性或脂溶性的有机化合物，或者是具有吸附作用的多聚化合物，使培养体系由于分配系数不同而形成上、下两相，细胞在其中一相中生长并合成次生代谢物，这些次生代谢物又通过主动或被动运输的方式释放到胞外，并被另一相所吸附。 常见的几种植物固定化生物反应器系统 ② 填充床生物反应器： 细胞固定在胶粒、金属或泡沫颗粒或连续多个网中，或位于支持物表面。细胞固定不动。 （a） 出口 进口 填充床生物反应器 优点：单位体积固定细胞量大 缺点：混合效果低，对必要的氧传递、PH、温度控制和气体产物的排除造成了困难，影响了细胞的培养，同时大颗粒的低效率传质、填充体成分供应和排除的困难 常见的几种植物固定化生物反应器系统 附着式固定化培养系统——膜生物反应器 常用中空纤维和螺线式卷绕反应器。 缺点：传质效率低、易阻塞，产物收获较困难，投资大。 膜反应器的优点是可以重复使用，因此，尽管投资较大，仍较经济。另外，由于植物细胞代谢不像微生物那样旺盛，因而可以采用更厚的细胞层。 细胞 细胞 营养物入口 营养物入口 营养物出口 营养物出口 营养物质 a-中空纤维反应器 b-螺线式卷绕反应器 四、产物的分离纯化 （不作要求） 1、细胞破碎 2、沉淀分离 3、层析分离 4、萃取分离 5、结晶 6、浓缩与干燥 8、抽提 在培养体系中加入脂溶性有机物，或是具有吸附作用的多聚化合物（如大孔树脂等），使培养体系形成上、下两相，细胞在水相中生长和合成次生物质，次生物质分泌出来转到有机相中。 两相培养技术 两相培养 组成：培养相和提取相组成 类型：液-液系统和液-固系统 液-液系统：分离相主要使用液体石蜡、烷类化合物。分离相和培养基的化学性质和比重不同。 液-固系统：是指提取相以固态形式存在于系统中，主要通过吸附分离目的产物，目前使用的主要有活性炭、硅酸镁载体、沸石、蚕丝以及树脂。 红豆杉细胞两相培养生产紫杉醇 实验材料：东北红豆杉细胞系 培养基： 第一相：B5培养基， 第二相：5％(v/v)的松油醇， 产物释放剂：5％(v/v)二甲基亚砜。 接种量:10g (鲜重)/100ml培养基/250mL 三角烧瓶。 培养条件：25℃，120rpm，黑暗培养。 ■细胞干重；▲紫杉醇产量；两相系统—— ；单相系统－－ 第二相的加入，使得紫杉醇产量提高到30.19mg/L，比对照增加103%；63％的紫杉醇从胞内的释放出来，其中有75％转移至有机相。 a 添加的有机物无毒害作用 b 产物溶于有机物或被其吸收 c 两相易分离，有利于产物回收 d 有机物等不吸收培养基中的有效成分 前提条件： 五、植物细胞大规模培养中存在的问题 P89 ? 离体植物细胞的生长和产物的合成速度慢； ? 细胞株在培养过程中可能会出现退化或变异； ? 细胞培养过程中易聚集，且对机械剪切力敏感； ? 生产成本过高 40KL世界最大容量植物 细胞培养罐（紫杉醇细胞） * 使用此方法时要对细胞给予渗透压保护。 * 在进行细胞株（种子细胞）选择以及一些需要对细胞活动跟踪观察的情况下，必须进行真正意义 的单细胞培养 * 由Jones等在1960年设计的。 在人工制造的无菌小室中，将一滴悬浮细胞液培养在少量培养基上，使其分裂增殖形成细胞团的方法。细胞起始密度：30～80个/室。 石腊油的作用：1、使细胞与外界隔离防止污染。2、具有一定的通气性，有利于细胞生长。我国的陆文梁（1983）采用四环素眼膏代替石腊油，成功地获得了烟草单细胞植物，且较好地解决了污染问题。 * 为了进行单细胞活体连续观察而建立的