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第二章 显微镜 一、特殊光学显微镜 与普通显微镜的区别是照明方式 可以分辨0.004μm的微粒（普通只能分辨0.2μm ，≤0.1μm者称超显微粒子） 只能看到微粒的数量、位置、轮廓和运动状态，无法观察微粒的内部结构 用强光照射标本，但是不让强光进入物镜 散射光与暗背景之间形成较强的对比 进入物镜的是强光在标本上形成的丁达尔效应而产生的散射光 丁达尔效应（Tyndall effect）：当一束光线透过胶体，从入射光的垂直方向可以观察到胶体里出现的一条光亮的“通路”，这种现象叫丁达尔现象，也叫丁达尔效应（Tyndall effect）、丁泽尔现象、丁泽尔效应. 粒子入射光波长很多倍--光的反射 如果粒子小于入射光波长--光的散射 这时观察到的是光波环绕微粒而向其四周放射的光，称为散射光或乳光。丁达尔效应就是光的散射现象 对于真溶液，虽然分子或离子更小，但因散射光的强度随散射粒子体积的减小而明显减弱，因此，真溶液对光的散射作用很微弱。 散射光的强度，还随着微粒浓度增大而增加，因此进行实验时，胶体浓度不要太稀。 由于溶液粒子1 nm，胶体粒子40~90nm可见光波长（400 nm～750 nm）产生光的散射现象 采用采用特种聚光镜--侧向照明技术 透明物体采用环形光阑挡住中间照明 不透明物体采用反射光暗视野照明方式 同心圆暗场光阑+环形反射镜 荧光显微镜，是以紫外线为光源来激发生物标本中的荧光物质，观察到各种颜色的荧光 观察自发光或受激发光样品，或用荧光标记物标记样品，研究荧光物质在组织和细胞内的分布 特点： 与暗视场形成对比，对比度强 可用于观察活体组织的生理或代谢过程 用来分析样品的化学组分 荧光物质标记后观察 荧光显微镜--原理 某些物质在一定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光（如可见光），这种光就称为荧光。 荧光显微镜利用特殊的照明装置发出激发光，诱发荧光物质发出荧光，通过物镜作用在样品上，再由目镜观察到肉眼可见的荧光。 荧光显微镜--照明装置 常用高压水银灯为光源，光谱峰280~335nm、365~435nm、545~580nm 照明方式分透射、落射或组合照明 配合专用聚光镜有明场、暗场、偏光和相衬等照明方式 荧光显微镜--滤色系统 滤色系统由激发滤板和压制滤板组成。 一、激发滤板根据光源和荧光色素的特点可分为三类激发滤板 1、紫外蓝光激发滤板：可使300～450nm的光通过。 2、紫外蓝光激发滤板：可使300～450nm的光通过。 3、紫蓝光激发滤板：它可使350～490nm的光通过。 二、压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过，提供相应波长范 围的荧光。与激发滤板相对应，可分为三类： 1、紫外光压制滤板：可通过可见光、阻挡紫外光通过。 2、紫蓝光压制滤板：能通过510nm以上波长的光（绿到 红）。 3、紫外紫光压制滤板：能通过460nm以上波长的光（蓝 到红）。 荧光显微镜--CCD 荧光显微CCD：是与荧光显微 镜密切相关的数码摄像产品 它可以将荧光显微镜拍摄的显微摄影产品通过usb接口传输到电脑中，便于图像的采集研究 通过荧光显微镜CCD我们可以拍摄到比单纯使用荧光显微镜更好的图片。荧光显微镜CCD可以连接荧光显微镜组成显微成像系统。 倒置显微镜Inverted microscope 物镜与照明系统颠倒 配有长工作距离的聚光镜 物镜放大倍数不超过40倍 可使用各种培养皿和培养瓶，特别适用于对活体细胞和组织，流质，沉淀物等进行显微研究，常装有摄影（像）装置。 倒置显微镜Inverted microscope 补充内容 光的波粒二象性 干涉现象：是波动独有的特征，只有两列频率相同，相位差恒定，振动方向一致的相干光源在空间相遇时相互叠加，才能在某些区域始终加强，在另一些区域则始终削弱，形成稳定的强弱分布的现象--光的干涉。 衍射现象：光绕过障碍物偏离直线传播路径而进入阴影区里的现象，叫光的衍射。 光通过单轴晶体时的双折射现象 一.双折射现象： 1.双折射：当一束光在各向异性介质折射时，折射光一般将分为两束，这种现象称为晶体的双折射 2.双折射现象的特点和规律： 当一束自然光正入射到冰洲石（或碳等）晶体界面上时，在晶体内部分成两束折射光，一束总是满足折射定律称寻常光（o光），另一束不满足折射定律，称为非常光（e光），双折射后的偏振光都是线偏振光，并且振动方向相互垂直。 小常识 . . . . .