红花高效液相色谱指纹图谱剖析.pptVIP

* 实例一 红花高效液相色谱指纹图谱研究 红花为菊科红花的花，活血化瘀中药，有效成分为查耳酮类和黄酮类成分，其中羟基红花黄色素Ａ为主要有效成分之一。主产地新疆。红花药材指纹图谱研究主要针对查耳酮类和黄酮类成分，以新疆主产区药材为主要研究对象。 1.实验材料 样品 红花采自新疆、内蒙古、陕西、河南、安徽等地，共31份样品，均经品种鉴定。 对照品 羟基红花黄色素Ａ，实验室自制。 试剂 乙腈（美国Tedia公司，色谱纯）、重蒸去离子水（实验室制备）、磷酸（分析纯） 2.溶液制备 供试品制备 取样品粉末(过4号筛)2.0ｇ,精密称定,置具塞三角瓶中,加水50ｍL,称重,90℃水浴中提取1ｈ,称重,补足减失重量,滤过,精密量取续滤液10ｍL,微孔滤膜滤过,作供试品。 参照物制备 精密称取羟基红花黄色素Ａ对照品适量,加水制成0.2ｇ/L的溶液，作参照物。 3.色谱条件与系统适用性试验 Waters600型高效液相色谱仪,2996二极管阵列检测器, Waters Millenium色谱工作站； 色谱柱为Phenomenex Luna (250mm ? 4.6mm ID, 5μm)； 乙腈-0.5%磷酸为流动相梯度洗脱，运行时间65min； 柱温25℃； 流速1.0mL/min； 检测波长275nm。 进样量：供试品及参照物各20μl。 4.测试方法 取待测溶液适量 ,注入液相色谱仪，按选定的测试条件，测定色谱图。并进行实验方法学考察。 流动相选择 经实验比较，乙腈-0.5%磷酸溶液梯度洗脱，能较好地使样品中各色谱峰分离且出峰最多；分析时间65min，样品1.5h图谱显示，65min后无特征峰出现。 A：乙腈，B：0.5%磷酸溶液 0—55min A（％）0—25 B（％）100—75 55—65min A（％）25—0 B（％）75—100 方法学考察 稳定性试验： 取同一批次供试品，在室温下放置，每隔一定时间进样后，测定，用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，结果相似度均大于0.95，表明供试品在测定的24h内保持稳定。 精密度试验： 取同一批次供试品，连续进样5次，考查进样精密度，用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，结果相似度均大于0.95，表明供试品进样精密度良好。 重现性试验： 取同一批次样品，按上法分别制备5份供试品，测定，用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，结果相似度均大于0.95，表明本法测定的重现性良好。 供试品测定 同一上述实验条件下，测定10批次供试品HPLC色谱图。 5.指纹图谱的分析与评价 根据31批次供试品测定结果所给出的峰数、峰值（积分值）和峰位（相对保留时间）等相关参数，进行分析、比较，制定优化的指纹图谱。 红花高效液相色谱可分离出约50多个色谱峰，经与参照物对照以及比较所有测定和记录的色谱图，选取其中36个共有峰作为指纹图谱的特征峰。 共有指纹峰标定 根据10批次供试品测定结果，标定共有指纹峰。红花HPLC指纹图谱中，共有指纹峰36个。与羟基红花黄色素Ａ参照物峰（22号峰）相比，其它35个共有指纹峰相对保留时间依次为：0.11、0.17、0.20……1.84、2.03。 羟基红花黄色素Ａ 共有指纹峰面积比 除参照物峰以外，无共有指纹峰面积（峰）超过总峰面积的10%。 相似度评价 各地商品红花的指纹图谱, 采用“计算机辅助相似度评价系统”软件进行数据处理,结果样品a～n的相似度分别为0.96,0.78,0.88，……0.93。新疆动 新疆主产地, 不同红花药材的指纹图谱相似度较高（均0.90)。尤其是吉木萨尔县红旗农场——红花栽培基地的红花指纹图谱相似度更高（多0.95)。 指纹图谱中,保留时间在15～65min的12～36号色谱峰峰形及相对比例较稳定,体现了红花的共同特征；而保留时间在0～15min的1～11号色谱峰则变化较多,是不同药材的差异所在。 商品红花指纹图谱的主要差异集中在4,5和6号峰的峰形及其相对高度上。新疆主产地红花指纹图谱,主要差异集中在2,3,4,5,6,8和9号峰的峰形及其相对高度上。 实例二 西青果高效液相色谱指纹图谱研究 西青果为使君子科诃子或绒毛诃子的幼果。诃子含鞣质类、三萜类、酚酸类等成分。其中没食子酸、诃黎勒酸、诃子酸等鞣质为主要化学成分，含量高达23～37%。西青果传统来源主要从印度及斯里兰卡进口。 1.实验材料 样品