第04章 病毒.ppt

区别： 内裂解：宿主细胞内大量噬菌体分泌酶引起的 细胞裂解，释放大量噬菌体。 自外裂解：胞外噬菌体分泌酶引起的细胞裂解， 没有子代噬菌体的释放。 溶源菌的检测方法： 法1：少量溶源菌+大量敏感指示菌+肉汤琼脂培养基 特殊噬菌斑（中央溶源菌菌落，周围透明） 法2：溶源菌经uv照射，进一步培养，滤去培养物中活细菌， 将滤液与敏感菌混合培养，形成透明噬菌斑。 一、病毒的复制周期（replicative circle） 自病毒吸附于细胞开始，到子代病毒从感染细胞释放到细胞外的过程，称病毒的复制周期或复制循环。 一般分为5个阶段： ① 吸附； ② 侵入与脱壳； ③病毒大分子的合成，包括病毒基因组的表达与复制； ④装配； ⑤ 释放； 病毒吸附蛋白（viral attachment potein,VAP）: 亦称“反受体” 能够特异性地识别细胞受体并与之结合的病毒表面的结构蛋白 无包膜病毒的VAP往往是衣壳的组成部分， 如：T-偶数噬菌体的尾丝蛋白； 有包膜病毒的VAP为包膜糖蛋白， 如：流感病毒包膜表面的刺突； 植物病毒： 通过因人为地或自然的机械损伤所形成的微伤口进入细胞； 或者靠携带有病毒的媒介，主要靠是有吮吸式口器的昆虫取 食将病毒带入细胞。 植物病毒一旦进入细胞后，增殖产生的子代病毒或病毒核酸 可通过病毒编码的运动蛋白（movement protein）与胞间连 丝的相互作用从受染细胞进入邻近细胞。 脱壳： 脱壳是病毒侵入后，病毒的包膜和/或壳体除去而释放出 病毒核酸的过程。 脱壳是病毒基因组进行功能表达所必需的感染事件。 T-偶数噬菌体脱壳与侵入是一起发生的 动物病毒存在不同的结构类型和不同的侵入方式， 其脱壳过程也较复杂。 病毒的毒粒消失，失去原有的感染性，进入潜隐期。 （1） 核酸的复制、转录 根据病毒核酸的类型、 复制、转录方式的不同，可分为6类： 4. 病毒的装配与释放 病毒的释放标志病毒复制周期结束 大多数噬菌体都是以裂解细胞方式释放 丝杆噬菌体（如M13或fd）不杀死细胞，子代毒粒以分泌方式 不断从受染细胞中释放，并同时完成毒粒的组装。 有包膜的动物病毒是在从宿主细胞核芽出 或细胞质膜芽出的过程中裹上包膜而形成 包膜病毒。 二、一步生长曲线（one step growth curve） 研究病毒复制的一个实验，定量描述烈性噬菌体生长规律的曲线。 反映3个参数：1）潜伏期；2）裂解期；3）裂解量 1939年，Max Delbruck Emory Ellis： E. coli / bacteriopage 1、用噬菌体的稀释液感染高浓度的宿主细胞； 2、数分钟后，加入抗噬菌体的抗血清（中和未吸附的噬菌体）； 3、将上述混合物大量稀释，终止抗血清的作用和防止新释放 的噬菌体感染其它细胞； 4、保温培养并定期检测培养物中的噬菌体效价（对噬菌体含量 进行计数）； 5、以感染时间为横坐标，病毒的感染效价为纵坐标，绘制出 病毒特征性的繁殖曲线； 该实验标志着分子病毒学、分子生物学和分子遗传学的建立 Max Delbruck因此荣获1969年Nobel Prize （参见P72） 一步生长曲线（one step growth curve） 噬菌体复制（裂解周期） 分为三个阶段： 1、潜伏期 从噬菌体吸附到细胞到释放 出新噬菌体的最短时期。 1） 隐晦期：无成熟的噬菌体粒子。2）胞内积累期。 2、裂解期 随着宿主细胞迅速裂解，溶液中噬菌体粒子数目急剧增加，直到最高值的一段时间。 3、平稳期 指感染后的宿主已全部裂解，溶液中噬菌体效价达到最高点后的时期。 效价（titre）或噬菌斑形成单位（plaque-forming unit, pfu） 每毫升试样中所含有的噬菌体粒子数。（ p77） 效价的测定方法 双层平板法： 下层：固体培养基 上层：敏感菌+噬菌体+半固体培养基 形成噬菌斑 （计平板上的噬菌斑数量 ） p78 液体稀释管法： 接菌 接噬菌体 液体培养基：清 混