722高效液相色谱分析.ppt.pptVIP

三、HPLC的操作 操 作 要 求 3 2 维护要求 色谱柱清洗保存 反相色谱柱：用20%甲醇溶液清洗10个柱体积，保存在90%的甲醇溶液中。 分子筛色谱柱：用纯水清洗10个柱体积，保存在5%叠氮化钠水溶液中。 离子色谱柱：用0.02M盐，pH6.5溶液清洗10个柱体积，保存在含5%叠氮 化钠0.02M盐，pH6.5溶液中。短期保存在低盐的流动相中。 三、HPLC的操作 操 作 要 求 3 2 维护要求 灯的保养 在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。 三、HPLC的操作 方法编辑与数据采集 3 3 1.1 开机： 1.1.1 打开计算机，登陆windows操作系统。 1.1.2 打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标,进入化学工作站，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。 1.1.3 把各流动相放入溶剂瓶中。 1.1.4 旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。将泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%，打开泵，排出管线中的气体2—3分钟，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力。 1.1.5 依此切换到B、C、D溶剂分别排气。 1.1.6 将泵的流量设到0.5ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）。 1.1.7 再将泵的流量设到0.8ml/min，2分钟后将泵的流量设到1ml/min，冲洗色谱柱20-30分钟。 1.1.8 把缓冲液换成流动相，待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情况。 * 2014年7月19日 高效液相色谱的使用 主讲人：陆艳凤 主要内容 3 1 2 HPLC的应用范围 HPLC的构造—Agilent 1260 HPLC的操作 一、HPLC的应用范围 发 展 历 史 3 1 1906年 俄国植物学家Tsweet创立色谱法 30年代 茨维特分离绿叶色素 40年代 薄层色谱（ TLC），纸色谱 50年代 气相色谱（GC）出现使色谱具备分离和在线分析功能 60年代末 HPLC出现，使色谱分析范围进一步扩大 一、HPLC的应用范围 使 用 原 理 3 2 色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 一、HPLC的应用范围 产 品 概 述 3 3 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。 一、HPLC的应用范围 应 用 范 围 3 4 高效液相色谱法使用特点： 1、有利于分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。 2、能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。 一、HPLC的应用范围 应 用 范 围 3 4 1、医药方面：可以了解监控药物生产过程中主体和副体产物的存在情况。另外通过测定人体血或尿中药物的含量分析药物在体内的代谢情况也是近来医药研究的主要内容之一。 2、生化方面：高效液相色谱法在生化方面的研究主要体现在对RNA、DNA及其碎片的研究，对氨基酸、肽和蛋白质的分析，以及对酶和糖的分析。 3、天然产物：天然产物的组分非常复杂，例如中草药等，用高效液相色谱法进行分离分析，具有简单快速的特点。 一、HPLC的应用范围 应 用 范 围 3 4 4、食品方面：有效分析控制食品或饲料中各种添加剂及有害有毒成分，是当前食品科学中的重要课题，高效液相色谱法已经被广泛应用于这些领域。 5、环境分析：在对大气中污染物的成分分析，废水，废汽和汽车尾气中有害组分的分析中，高效液相色谱法发挥着很大的作用。 6、农业分析：在农业的发展中，高效液相色谱也发挥着很大的作用。它主要用来对各种农作物中营养成分进行分析，特别是对多糖、脂肪酸、蛋白质等分析都是极为有效的方法。 二、HPLC的构造—Agilent 1260 流 程 与 构 造 3 1 泵 柱温箱 自动进样器 检测器 溶剂柜 脱气机 流路：自上而下 二、HPLC的构造—Agile