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蛋白质结构基础 蛋白质工程：是以对蛋白质结构和功能关系的认识为依据，借助基因工程技术和X-射线衍射分析技术，从基因入手，通过定点突变改变核苷酸顺序，以达到改造现有蛋白质分子、或创造新的蛋白质分子目的的技术学科。 蛋白质工程的程序： 1.筛选纯化需要改造的目的蛋白，研究其特性常数等 2.制备结晶，并通过氨基酸测序、X-晶体衍射分析、核磁共振分析研究，获得蛋白质结构和功能的相关数据。 3.结合生物信息学的方法对蛋白质的改造进行分析 4.由氨基酸序列及其化学结构预测蛋白质的空间结构，确定蛋白质结构和功能的关系，进而从中找到可以修饰的位点和可能的途径。 5.根据氨基酸的序列设计核酸引物和探针，并从cDNA文库或基因文库中获取编码该蛋白的基因序列； 6.在基因改造方案设计的基础上，对编码蛋白的基因序列进行改造并在不同的表达系统中表达； 7.分离纯化表达产物，并对表达产物的结构和功能进行分析。 蛋白质：是生活细胞内含量最丰富、功能最复杂的生物大分子，参与几乎所有的生命活动，与核酸共同构成了生命现象的主要物质基础，根据其形状、结构和溶解度的不同可以分为：纤维状蛋白质、球状蛋白质、膜蛋白。 蛋白质的生物学功能 1催化 2结构成分 3贮存 4运动 5转运 6调节 7信息传递 8支架作用 9防御和进攻 中性：甘氨酸Gly 、丙氨酸Ala、缬氨酸Val、亮氨酸Leu 异亮氨酸Ile 含有羟基或硫：丝氨酸Ser 、苏氨酸Thr半胱氨酸Cys 脂肪族氨基酸： 甲硫氨酸Met 酸性：天冬氨酸Asp 谷氨酸Glu 天冬酰胺Asn 谷氨酰胺Gln 碱性：赖氨酸lys 精氨酸Arg 氨基酸 芳香族 ： 苯丙氨酸Phe 酪氨酸Tyr 色氨酸Trp（280nm吸收最多） 杂环 ： 组氨酸His 脯氨酸Pro 八种天然蛋白质：缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、苏氨酸、赖氨酸 蛋白质结构： 二级结构：一段连续的肽单位借助于氢键，排列成的具有周期性结构的构象。二级结构时多肽链主链局部区域的规则结构，它不涉及侧链的构像和与多肽链其他部分的关系。 二级结构的类型:α-螺旋、β-折叠，回折、环肽链、无规则卷曲。 超二级结构：相邻的二级结构单位组合在一起，彼此相互作用，行为规则排列的组合体，以同一结构模式出现在不同的蛋白质中。 结构域：二级结构和结构模体以特定的方式组织连接，在蛋白质分子中形成两个或多个在空间上可以明显区分的三级折叠实体。结构域是蛋白质折叠中的一个结构层次，介于超二级结构和三级结构之间，是蛋白质是三级结构的基本单位，也是蛋白质功能的基本单位。 结构域的类型：全α结构域、全β结构域、α/β型结构域（max） 三级结构的作用力：氢键、疏水键、盐键、范德华力。 蛋白质的空间结构与功能的关系 1蛋白质的空间构象是其功能活性的基础2蛋白质变性时由于空间结构的破坏，致使蛋白质生物功能的丧失3变性蛋白质在复性厚，构象复原，活性又能恢复 维持蛋白质空间构象的作用力 1疏水效应 2氢键和范德华力 3共价交联和离子相互作用 4配位键 影响蛋白质构象的因素有哪些？ 1）氨基酸侧链的疏水性：疏水氨基酸侧链集中在一起形成疏水核心,使肽链形成球形。 2）范得华力：是万有引力的一种.分子中每一个原子与其它原子之间都有范得华力,维持着分子的稳定。 3）偶极相互作用：由分子中带有极性基团的氨基酸引起,这种基团的电荷分布不均,使分子形成偶极相互作用,这是分子稳定的因素。 4)静电相互作用：有些氨基酸带正电,有些带负电,电荷互相吸引或推斥,使分子形成特定构象 5）氢键：有两类，链内氢键由同一条肽链不同部位的C=O和N-H基团形成；链间氢键是由不同肽链之间氨基酸侧链形成的。两种氢键对构象形成都起重要作用。 6)熵效应：若蛋白质在油中溶解,其分子构象肯定与在水中的构象是不同。 蛋白质的变性：天然蛋白质分子受到某些物理因素或者化学因素的影响时，会引起蛋白质天然构象的破坏，导致生物活性的降低或完全丧失的过程。实质是蛋白质分子中的次级键被破坏，引起天然构象解体，形成无规则卷曲的现象。 蛋白质的复性：当变性因素除去后，变性蛋白又可以重新恢复到天然构象的现象。蛋白质体外再