内皮细胞损伤机制和保护药物筛选研究.pdf

oFPhD DfSSERT“rIoN Medical Chinese Medical Union of Sciences＆PekingCollege Academy 应激及内毒素者IIilJ-以引起内皮细胞的损伤，但损伤机理不同。少 ／ 第二部分：内皮细胞损伤保护药物的筛选研究， ／首先，本实验研究用ELlSA方法建立了‘个内皮细胞ICAM-l抑制剂的 高通量筛选模型，并用该模型筛选了近2000个化合物。研究结果表明，LPS 刺量和时间依赖性的增加内皮细胞ICAM．1的表达。在初筛得到的32个化合 物中，用MTT法检测，有毒性作用的化合物有26个，且测定了剩余的6个 也有抑制作用。 其次，本研究还用荧光法建立了MMPs抑制剂的筛选模型。结果显示， 同一个化合物对MMP．1，2和9的抑制作用，{：不相同。{ 第三部分：药物对内皮细胞损伤的保护作用， r k在这部分，我们主要观察了总川酚酸、EGb76l和硫酸多糖916划讷皮细 胞的保护作用。所用方法同第一部分。结果表明，总丹酚酸100 pg／ml一可以湿 ttM 著抑制100 H202引起的内皮细胞存活率的降低(P0．001)，还明显降低 01)， Ha02绣导的内皮细胞的凋亡作JfJ，抑制内皮细胞caspase一3的活性(P0 显著降低H202诱导的内皮细胞游离钙的升高(P0．001)。总月酚酸100p．g／ml 还可以抑制100 ch01．triol对内皮细胞的毒性作用，提高细胞的存活：每 laM 的产生(P0．001)。总丹酚酸还剂量依赖性地降低中性粒细胞与TNFct诱导的 内皮细胞的粘附作用，100“∥ml可以显著抑制fMLP激活的中性粒细胞与内 皮细胞的粘附作用(P0．001)，对TNFct诱导的粘附分子的上调作用也有明显 的抑制作用。TNFcc与内皮细胞孵育24h，可以显著降低内皮细胞NO的产生 (P0．001)。提酊给予总丹酚酸30min可以增加NO的产生，lO和100p．g／ml 生的过量的NO对内皮细胞有毒性作用，显著降低内皮细胞数(P0．001)， NOS抑制剂L—NNA和总月‘酚酸可以对抗LPS的这种作用。另外，LPS刺激 内皮细胞后，内皮细胞释放NO的能力降低(P0．01)，而内皮细胞PDGF—B 的表达却显著升高，且LPS刺激内皮细胞后的条件培养基显著促进平滑肌细 胞的增殖(P0．001)。总丹酚酸在体外对MMPs的活性无明显影响，但是它 可以显著抑制TNFct诱导内皮细胞产生的MMPs的活性。总之，总丹酚酸以 上的作用结果提示．总J斗酚酸的作用机制与其抑制脂质过氧化、细胞内[Ca”h 的升高和caspase一3的活性、抑制粘附分子的表达、对抗NO的细胞毒作用、 V D OFPh DISSER]“lJON Medical Aca‘km、ofMedical Union College Chinese Sciences＆Peking 抑制PDGF—BB的合成等作片j有关。0 EGb 761和硫酸多糖916对内皮细胞的保护作用与总月酚酸部分类似。 EQb