微生物的实验室培养与应用上课资料.ppt

合作探究 1.锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？ 2.取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 3.除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 合作探究 4.取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，目的是？ 5.在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？ * * 课题1 微生物的实验室培养 1.提供营养和条件 2.防止污染 培养微生物的类型 有机 氮源： 有机 碳源： 无机 氮源： 提供 元素的物质 氮源 无机 碳源： 提供 元素的物质 碳源 主要来源 功 能 营养物质 CO2、CO32-、HCO3-等 牛肉膏、蛋白胨等 N2、NH4＋、NO3-等 牛肉膏、蛋白胨、尿素等 碳 氮 自养微生物 异养微生物 自养微生物 异养微生物 一.培养基： 微生物生存的环境和营养物质 1.基本成分： 思考：微生物“吃”什么？ 碳源、氮源、水、无机盐 一.培养基： 微生物生存的环境和营养物质 1.基本成分： 碳源、氮源、水、无机盐 2.特殊营养： 某些氨基酸、维生素、碱基等 （牛肉膏、蛋白胨中含有） 3.pH、氧气的需求； 4.种类： 固体培养基 液体培养基 有无 凝固剂琼脂 按物理性质可分成 1.牛肉膏提供 磷酸盐、维生素等营养物质； 2.蛋白胨提供 维生素等营养物质； 3.以上配方配制的是 （物理性质）的培养基。 4.牛肉膏蛋白胨培养基培养的是 型的微生物； 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml NaCl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 异养 碳源、氮源、 碳源、氮源、 固体 实例分析 耐高温需保持干燥的 物品，160～170℃ 1～2小时 接种环、接种针等 金属用具 70~75℃、30min 80℃、15min 100℃、5~6min 消毒 灭菌 定义 方法 较为温和理化方法， 杀死部分有害菌体 （不包括芽孢、孢子） 强烈的理化方法， 杀死所有微生物 （包括芽孢、孢子） 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂 紫外线 灼烧灭菌 干热灭菌 酒精、氯气、石炭酸等 高压蒸汽灭菌 培养基， 100KPa、 121℃、15～30min 二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌： 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。 （1）培养细菌用的培养基与培养皿 （2）玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3）实验操作者的双手 （4）接种环、接种针 （5）外植体 灭菌 灭菌 消毒 超净工作台 消毒 灭菌 一.培养基： 1.基本成分： 、 、 、 。 2.除上述基本成分，还要满足微生物对 、 和 的要求。 3.培养基的种类 （含琼脂） （不含琼脂） 二.无菌技术： 芽孢孢子能否消灭 常用的方法 消灭微生物的数量 作用强度 灭菌 消毒 水 氮源 部分 温和 碳源 无机盐 pH 氧气 特殊营养物质（生长因子） 固体培养基 液体培养基 强烈 全部 不能 能 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂 紫外线 灼烧灭菌 干热灭菌 . 高压蒸汽灭菌 小 结 单个 或少数菌体 2.特征： 大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。 1.定义： 三.菌落 固体培养基上 大量繁殖 子细胞群体 四.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 分散成单个细胞, 形成单个菌落 操作步骤： 计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 四.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化大肠杆菌： ⑴平板划线法： 菌种 划3个平板 1个不划线 1.接种： 接种环 防止划破培养基 （重复实验） （空白对照） 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 101 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 ⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： 菌液 微量 移液器 ⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： b.涂布平板： 不超