2.3纤维素的微生物的分离公开课课程.pptVIP

* * 纤维素：棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物； 课题3 分解纤维素的微生物的分离 能分解纤维素的微生物，有各种细菌、真菌和少数放线菌。 纤维素 纤维素酶 组成 分布 作用 C1酶、CX酶 葡萄糖苷酶 纤维二糖 葡萄糖 纤维素 由葡萄糖相连而成的高分子化合物 由C1酶、CX酶和 葡萄糖苷酶组成的复合酶 植物的根、茎、叶等器官，木材、作物秸秆等 某些微生物 1、果胶构成植物的细胞壁 2、用于纺织业、造纸业等 3、食品中的膳食纤维具有通便清扫的作用 纤维素酶能分解纤维素， 【基础知识】 （一）纤维素与纤维素酶 练习1.下列生物能分解纤维素的是（ ） ①人 ②兔 ③牛 ④蘑菇 ⑤纤维杆菌 A.①②③④⑤ B.②③⑤ C.②③④⑤ D.③⑤ C 实验：纤维素酶分解纤维素的实验 自变量：纤维素酶的有无 自变量的控制： 乙试管--1mL纤维素酶溶液 甲试管--等量的缓冲液 (不能加蒸馏水，会影响溶液pH)。 讨论：自变量是什么？ 因变量是什么？ 乙试管的滤纸条为什么会消失？ 甲试管的作用是什么？ 刚果红染色法 （二）纤维素分解菌的筛选 2、原理： 1、方法： 即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 刚果红能与纤维素形成红色复合物，而与水解后的纤维二糖和葡萄糖不发生这种反应。 红色复合物 红色消失，出现透明圈 纤维素 刚果红 （染料） 纤维素分解菌 纤维素酶 1、实验流程图： 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布在鉴别纤 维素分解菌的培养基上 筛选产生透 明圈的菌落 【实验设计】 1、分布环境： 富含纤维素的环境中 【资料一】土壤取样 讨论:如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？ 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的腐殖土壤中。 水 溶解后，蒸馏水定容至1000mL 氮素、生长因子 水解酪素 0.5g 生长因子、氮源、碳源（极少） 酵母膏 0.5g 无机盐 KCl 0.5g Na2HPO4·7H2O 1.2g KH2PO4 0.9g MgSO4 ·7H2O 0.5g 氮源、无机盐 NaNO3 1g 碳源（能源） 纤维素粉 5g 提供主要的营养物质 培养基组成 【资料二】选择培养 讨论 ①右边的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ ②这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ ③你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用 液体培养基，原因是配方中无凝固剂 有选择作用，本配方中的碳源是纤维素（粉），所以能分解纤维素的 微生物可以大量繁殖 自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤维素改为葡萄糖。 1、制备选择培养基： 【资料二】选择培养 2、选择培养的操作： 将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养。 为什么？ 微生物大量繁殖 为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？ 在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。(注意：该步骤也可省略，但纤维素分解菌较少。) 按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释101～107倍。 101 102 103 104 105 106 【资料三】梯度稀释 1、制备鉴别培养基: 【资料四】将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 2、涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml涂布在培养基上，30～37℃倒置培养 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000mL 100mL 15g 0.25g 1g 5～10g 土豆汁 琼脂 KH2PO4 酵母膏 CMC-Na 鉴别纤维素分解菌的培养基配方 水 上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL 凝固剂 琼脂 15g 碳源 土豆汁 100mL 无机盐 KH2PO4 0.25g 碳源、氮源、生长因子 酵母膏 1g 碳源 CMC-Na 5~10g 提供的主要营养物质 培养基组成分 鉴别纤维素分解菌的培养基 (水溶性羧甲基纤维素钠) 参照课本刚果红染色法，挑选产生透明圈的