ppDDE、βBHC及其联合对大鼠睾丸支持细胞Vimentin、Ncadherin与FSHR表达的影响.pdf

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 有重要意义。本文以 p, p’-DDE 和-BHC 作为受试物，进行两者单独及联合染毒， 探讨 p, p’-DDE 、-BHC 单独及联合作用对大鼠睾丸支持细胞 Vimentin 、 N-cadherin 和 FSHR 的影响，为揭示有机氯农药对雄性生殖系统作用的可能分子 机制提供理论依据。 第一部分 p, p’-DDE 、β-BHC 及其联合对支持细胞活力的影响 目的：探讨p, p’-DDE 、β-BHC 单独及联合染毒对支持细胞活力的影响，确 定培养细胞的染毒剂量。 方法：对离体培养两天的支持细胞分别用10、30、50、70mol/L 的p, p’-DDE 、 -BHC单独及联合染毒24h ，MTT 比色法测定其在波长490nm处的吸光度值，计 算细胞存活率。 结果：p, p’-DDE 、β-BHC 单独及其联合染毒作用于支持细胞 24 h 后，随着 染毒浓度的增加支持细胞的吸光度值逐渐降低。与溶剂对照组相比，p, p’-DDE 和 β-BHC 在 50mol/L 和 70mol/L 单独染毒组吸光度明显降低，差异具有统计 学意义（P0.05 ）。50mol/L 联合组吸光度显著降低，与溶剂对照组和等浓度 p, p’-DDE 和 β-BHC 单独染毒组相比，差异具有统计学意义（P0.05 ）。 结论：p, p’-DDE 和 β-BHC 染毒浓度达 50mol/L 时，开始影响支持细胞的 活力；p, p’-DDE 和 β-BHC 二者联合染毒对支持细胞活性的影响强于单独染毒。 第二部分 p, p’-DDE 、β-BHC 及其联合对离体培养支持细胞 Vimentin 、N-cadherin 和 FSHR 表达的影响 目的：探讨 p, p’-DDE 、β-BHC 及其联合作用对支持细胞 Vimentin 、N-cadherin 和 FSHR mRNA 和蛋白表达的影响。 方法：分别采用实时荧光定量 PCR （Real-time PCR ）和Western blotting 方 法测定离体培养支持细胞Vimentin 、N-cadherin 和 FSHR mRNA 和蛋白表达情况。 结果：支持细胞内 Vimentin mRNA 表达水平在 10μmol/L β-BHC 剂量组明显 4 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 升高，与对照组相比差异具有统计学意义（P0.05 ），其他剂量组均无明显差异。 随着各组染毒剂量的增加，Vimentin 蛋白表达呈逐渐降低的趋势，其中各 β-BHC 组、50μmol/L 联合组与对照组相比差异具有统计学意义（P0.05 ）。 随着各组染毒剂量的增加，支持细胞内 N-cadherin mRNA 表达水平呈先升 高后降低趋势，其中 30μmol/L p, p’-DDE 、30μmol/Lβ-BHC 单独组和 10μmol/L 联合组表达显著升高，与对照组相比差异具有统计学意义（P 0.05 ）。而 N-cadherin 蛋白表达水平在 30、50μmol/L p, p’-DDE 组、50μmol/L β-BHC 组及 各联合组均显著降低，与对照组相比差异具有统计学意义（P0.05 ）。 随着各组染毒剂量的增大，FSHR mRNA 表达水平呈先升高后降低趋势，其 中 10μmol/L p, p’-DDE 和 10μmol/L β-BHC 单独组表达明显升高，与对照组相比 差异具有统计学意义（P0.05 ）。50mol/L 各组表达均降低，其中 β-BHC 及联 合组与对照组相比差异具有统计学意义（P0.05 ）。10、50mol/L p, p’-DDE 组、 各剂量-BHC 组及 50mol/L 二者联合组 FSHR 的蛋白表达水平均降低，与对照 组相比，差异具有统计学意义（P0.05 ）；10mol/L 联合组与等浓度 p, p’-DDE 和 β-BHC 单独组相比，单独组 FSHR mRNA 表达水平降低明显，差异具有统