ERK和p38MARK信号通路参和赭曲霉毒素A诱导的人胃黏膜上皮细胞GES1G2期阻滞的研究.pdf

中文摘要 鉴于MAPK信号通路在细胞周期中的重要作用，我们提出这样的假 MAPK信号通路在 滞。为验证本假设，本实验将观察JNK、ERK和p38 细胞G2期阻滞的可能分子机制。 方法： 1细胞培养与处理 正常人胃黏膜上皮细胞(GES．1)培养于含10％胎牛血清、100U／ml 青霉素、100 胞贴壁生长。 选择对数生长期的细胞(传代后24 h)随机分为溶剂对照组和实验组。 浓度为0．08％的甲醇(每组设平行样本3个)，继续培养24 h收集细胞进 行相关指标检测。 2阻断剂处理 对数生长期GES．1细胞，分别给予10¨M min。实验分为4组，即 或者10州PD98059(ERK的阻断剂)预处理30 24 h后收集细胞检测相关指标。 3siRNA转染 分别用100 pmol OTA继续培养24 control h收集细胞进行相关指标检测。同时转染Negtive siRNA(NC OTA诱导的G2期阻滞的影响。 4流式细胞术检测细胞周期(FCM) OTA作用24h后，分别收集各组细胞，PBS洗涤，离心收集细胞， 用70％冰乙醇固定检测细胞周期分布情况。 blot) 5蛋白免疫印迹(Western 中文摘要 6免疫共沉淀(IP) 4C摇床过 提取细胞总蛋白，120昭各组蛋白加入lktgCyclird31抗体4 1复合物的形成情况 夜，进行琼脂糖凝胶电泳检测Cdc2．CyclinB 7统计 of 义。 结果： l 1．1 Western blot结果显示，OTA 5、10和20州处理24h后，p38和ERK 磷酸化水平明显高于溶剂对照组(火O．05)，而JNK磷酸化蛋白相对表达 1．2 ．．．，一 向 结果显示，与OTA 引起的p38磷酸化水平的升高(尸0．05)。 通路，而对JNK通路并未造成影响。 2．1 期阻滞的影响 20 FCM结果显示，PD98059预处理-I-OTA pM组G0／G1期细胞比例 OTA单独处理组明显增加，G2／M期细胞比例则显著降低 较20“M 滞。 2．2ERK siRNA干扰对OTA诱导的GES．1细胞G2期阻滞的影响 FCM研究结果发现，NCsiRNA处理组与溶剂对照组细胞周期分布无 明显差异(PO．05)。ERK 中文摘要 胞周期的影响，即显著了升高G0／G1期细胞比例，降低了G2／M期细胞 的比例(尸O．05)。表明ERK 细胞G2期阻滞。 3阻断p38信号通路对OTA诱导的GES．1细胞G2期阻滞的影响 3．1 期阻滞的影响 即与OTA GES．1细胞G2阻滞。 3．2 siRNA干扰对OTA诱导的GES．1细胞G2期阻滞的影响 p38 FCM研究结果发现，NC s