PPARα与YY1调控HO1对肿瘤细胞生物学功能的影响及机制研究.pdf

PPARα 和YY1 调控HO-1 对肿瘤细胞生物学功能的影响及机制研究 中文摘要 中文摘要 第一部分：PPARα对EGCG 和电离辐射敏感性的影响及机制研究 目的 研究 PPARα 活化对表没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG)和电离辐射敏 感性的影响及其机制。方法 首先利用CCK-8 试剂盒检测细胞存活率；分别采用 Western Blotting 和real-time PCR 检测蛋白质和mRNA 表达水平；采用PPARα 的 特异性激动剂和特异性拮抗剂来改变PPARα 的表达；应用荧光素酶报告基因系统 及染色质免疫共沉淀研究 PPARα 对血红素加氧酶-1(HO-1)的调控。采用克隆形成 实验检测PPARα活化对肿瘤细胞放射敏感性的影响；采用表达谱芯片检测PPARα 活化增加肿瘤细胞放射敏感性的机制。结果 随着EGCG 浓度的增加，PANC1 细 胞和A2780 细胞的存活率逐渐下降。当EGCG 处理肿瘤细胞后，PPARα蛋白水平 会随着EGCG 剂量的提高而增加。PPARα 的特异性激动剂—氯贝特能增加胰腺癌 PANC1 和卵巢癌A2780 细胞对EGCG 的敏感性，其机制是氯贝特能够抑制细胞保 护性HO-1 的诱导。荧光素酶报告基因实验和染色质免疫共沉淀实验(CHIP)表明， 活化的PPARα 能结合到启动子上的PPAR 结合元件(PPARE)上并抑制HO-1 的表 达。结论 本研究表明EGCG 能诱导肿瘤细胞中PPARα 的表达，PPARα活化能够 在转录水平上抑制HO-1 的表达，从而增加肿瘤细胞对EGCG 敏感性。PPARα 的 特异性激动剂氯贝特联合电离辐射可显著增加胰腺癌细胞的放射敏感性。表达谱 芯片表明氯贝特主要通过影响多个受体介导的信号通路。C18orf4、CDH5 等相关 基因参与了这一过程。PPARα 的特异性激动剂氯贝特联合EGCG 或电离辐射为临 床肿瘤治疗提供了一个新方案。 关键词：过氧化物酶体增殖物活化受体α(PPARα) ；表没食子儿茶素没食子酸 酯(EGCG)；电离辐射；血红素加氧酶-1(HO-1) I 中文摘要 PPARα 和YY1 调控HO-1 对肿瘤细胞生物学功能的影响及机制研究 第二部分：Ying Yang 1 在食管癌中的表达及功能研究 目的 研究YY1在正常食管组织和食管鳞癌组织中的表达及其在食管鳞癌发 展过程中的作用。方法 (1) 采用实时定量PCR ，检测24例正常食管组织样本和60 例食管鳞癌组织标本中YY1 的mRNA 的表达水平；通过免疫组化，检测102例食管 鳞癌组织、52例食管癌旁组织和15例正常食管组织中YY1 的蛋白水平。(2) 构建 YY1基因过表达载体和基因沉默载体，将两种载体转染人食管鳞癌TE-1细胞株， 挑选稳定株，通过实时定量PCR技术检测YY1 mRNA表达情况；通过Western Blot 检测YY1蛋白表达情况；对于转染YY1过表达载体或基因沉默质粒的TE-1细胞株， 采用MTT法测定细胞的生长，细胞照射后，采用显微镜进行克隆形成率的分析以 及对辐射敏感性的影响。(3) 采用Western Blot 、荧光素酶报告基因检测YY1对HO-1 的调控作用；通过免疫组化检测YY1与HO-1的相关性；通过转染和感染重组腺病 毒，检测HO-1对食管癌细胞的影响。结果 与正常的食管组织相比，人ESCC组织 中的YY1 mRNA 表达水平和蛋白水平显著升高。设计构建了过表达载体 pcDNA.3.1-YY1和基因沉默载体YY1-siRNA与阴性对照siRNA-NC ，YY1过表达载 体能增强YY1转录和翻译，siRNA载体能减弱YYI基因转录表达。稳定转染YY1过 表达载体的TE-1细胞中的YY1基因转录和蛋白表达显著增强，稳定转染siRNA载体 的细胞中YY1转录和翻译水平显著降低。YY1过表达载体转染细胞后，抑制TE-1 细胞的生长和克隆团的形成，但增加了其辐射抗性。YY1过表达，ESCC组织或细 胞中的HO-1表达水平上调，YY1表达水平下降则HO-1减少。与对照组Ad-EGFP相 比，转导Ad-HO-1，细胞生