第13章 植物脱毒技术 - 副本.pptVIP

第13章 植物脱毒技术;1 植物脱毒的意义;2 植物脱毒的方法; 图10－1植物生长区与热处理区关系图解（C是寄主的热死点，B是寄生物热死点）;方法：热处理可通过热水或热空气进行，前者对休眠芽效果较好，后者对活跃生长的茎尖效果较好。 热空气处理的操作技术：把旺盛生长的植物移入热疗室中，35～40℃处理一定时间（几分钟到数周不等）。热处理后应立即把茎尖切下嫁接于无病砧木或进行组培。 局限：并非所有的病毒都对热处理敏感 注意：热处理的温度和持续时间十分重要;2.2 化学方法;2.3 生物学方法;分生组织中含毒量低的可能原因： ①在植物体内，病毒可通过维管束组织系统长距离转移，转移速度较快，而分生组织中不存在维管束。②在旺盛分裂的细胞中，代谢活性很高，使病毒无法进行复制。③在植物体内可能存在着病毒钝化系统，它在分生组织中比其他任何区域具有更高的活性。④在茎尖中存在高水平内源生长素，可抑制病毒的增殖。;（2）外植体的选择;图10－2 马铃薯茎尖照片（上带2个叶原基）;;（3）操作方法;（4）影响茎尖培养脱毒效果的因素 ;培养基成分:; ②外植体的大小 ;同一种病毒在不同植物体内分布部位不同，在用茎尖培养脱毒时，必须确定病毒在植物茎尖中的分布部位，然后确定培养茎尖的大小（如TMV）。最好找出茎原基所带叶原基的数目与生长点大小的关系。 不同病毒种类在同一种植物中分布部位不同，培养不同大小的茎尖外植体，所脱除的病毒种类不同（表13.1）。 ;植物;③培养条件;④外植体的生理状态;2.3.2 愈伤组织培养脱毒法;烟草花叶病;2.3.3 微体嫁接离体培养脱毒法 ;（1）操作方法： ①砧木培养：剥离种胚，培养发芽（MS）；将发芽的上胚轴切下培养（带两片子叶）②嫁接：采用劈接法将接穗插入两片子叶中间的组织中。 （2）关键： ①剥离技术要求高②培养基的筛选要考虑砧木和接穗对营养组成的要求不同③接穗的取材季节适合;2.3.4 珠心组织培养脱毒法;2.3.5 花药培养脱毒法;2.4 综合脱毒方法;2.4.2 茎尖培养结合病毒钝化剂处理脱毒法 培养基中加入碱性孔雀绿、2,4-D及2-硫尿嘧啶等病毒抑制剂能显著提高茎尖培养苗的脱毒率。;3 脱病毒植株的检测;3.1 直接测定法（视觉观察法）;（1）变色：褪绿、黄化、花叶、斑驳、红叶等，常见病毒有；香石竹斑驳病毒、黄瓜花叶病毒、芋花叶病毒等。 （2）坏死：常见的坏死是病斑或斑点。有轮斑、环斑、条斑、条纹等。如香石竹坏死斑点病毒、凤仙花坏死斑点病毒等。 （3）畸形：植株可出现矮缩、矮化或叶片皱缩、卷叶、蕨叶等病状。 （4）萎蔫 ：主要是指植物根或茎的维管束组织受到破坏而发生供水不足所出现的凋萎现象。;当感病植物需相当长的时间才能表现可见症状，在这种情况下可采用指示植物法、血清法、核酸分析法和电镜法等进行病毒检测。;3.2 指示植物法;病毒种类;操作：;3.3 血清鉴定方法;3.4 核酸分析法;3.5 电镜鉴定法;4 脱病毒植株的保存;由茎尖培养得到的植株一般很少或没有遗传变异，但仍要检查其种性和遗传稳定性。 鉴定遗传稳定性方法： （1）农艺性状观察 （2）染色体镜检 （3）分子标记;5 脱毒植株的应用;马铃薯脱毒种薯的生产程序：;;;;;;;②原原种的生产 ③原种生产 ④一级种薯生产 ⑤二级种薯生产 ;;;;;;6 通过茎尖培养消除病毒的注意事项;然后应当检查实验植物是否携带所疑有的病原菌，并确定茎尖外植体的适当大小，能导致生长最快和最有??能消除病毒的培养条件。 最后要反复检查茎尖产生的植株是否还带着疑有的病原菌，并在能杜绝任何再侵染可能性的条件下，繁殖那些确已脱毒的植株。;复习思考题：