3.4.3微生物制药课件.pptVIP

第二章 微生物制药;一、微生物药物的几个相关基本概念 二、微生物药物的分类 三、微生物药物的应用 四、药源微生物及微生物药物的筛选技术 五、微生物药物的发酵生产技术 六、微生物药物的分离、精制和鉴别 七、废弃物的综合利用和环境保护;四、药源微生物及微生物药物的筛选技术;（三）新微生物药物的筛选;培养基主要是供给微生物生长和合成抗生素的材料。;初筛方式： 固体平板发酵—— 液体振荡培养——;2、筛选模型的研究与应用;（1）常规的筛选方法;（2）定靶筛选;细菌细胞壁合成抑制剂的筛选;以耐药机制为依据的筛选方法;;细菌的耐药机制主要有4种： 细菌产生一种或多种水解酶或钝化酶来水解或修饰进入细菌细胞内的抗生素，使之失去生物活性； 抗生素的作用靶点由于发生突变或被细菌的某种酶修饰而使抗菌药物无法发挥作用，以及抗生素作用的靶酶的结构发生改变使之与抗生素的亲和力下降； 由于细菌细胞膜渗透性的改变或其他有关特性的改变； 细菌具有一种依赖于能量的主动转运机制，它能够把进入胞内的药物泵至胞外。;β-内酰胺酶抑制剂的筛选;3、高通量筛选;高通量筛选的模型： 细胞模型——观察待测样品对细胞的作用，反映药物对细胞生长等过程的综合作用。包括各种正常细胞和病理细胞。 分子模型——包括受体、酶等，药物作用的靶点明确。 其他模型;现阶段的微生物药物筛选主要研究方面： 产生菌的来源 微生物的初筛发酵 新的筛选模型和方法;四、药源微生物及微生物药物的筛选技术;目的——将产生菌的一些有益变异，通过不断的筛选和培育，为研究和生产提供更多合乎需要的高产优质新菌种。;1、自然选育;1）从自然界分离获得菌株;第三次平板分离 ↓ 第三次原种斜面 ↓ 复筛（1株3-5瓶） ↓ 第四次平板分离 ↓ 第四次原种斜面 ↓ 再复筛 ↓ 较优化菌株1-3株;2）从自发突变体中获得菌株;2、诱变选育;诱变育种的主要环节：;出发菌株的选择;1）诱变剂;防护面罩;各种化学诱变剂常用的剂量和处理时间;2）影响诱变效果的因素;3）筛选的方法;摇瓶初筛 ↓ 挑出高产斜面 ↓ 菌种保藏（砂土管、冻干管或制备固体孢子） ↓ 摇瓶复筛（复筛次数及摇瓶数以及培养基种类根据情况决定） ↓ 挑出高产菌株 作稳定性试验和菌种特性考察 ↓ 放大试验罐、中试考察 ↓ 大型投产试验;突变株的筛选方法;影印平板（Replica plating）法是Lederberg夫妇在1952年建立;用梯度平板法定向培育若干代谢产物的高产菌株;;根据形态变异淘汰低产菌株，根据平皿反应挑取高产菌株。;;理性化筛选;降低终产物浓度;杂交育种——一般指两个不同基因型的菌株通过接合或原生质体融合，使遗传物质重新组合，再从中分离和筛选出具有新性状的菌株。;1）常规的杂交育种;2）原生质体融合;A.标记菌株的筛选;B.原生质体的制备;影响原生质体制备的因素：;C.原生质体的融合和再生;检查原生质体形成和再生的指标：;D.融合子的选择;原生质体融合与传统杂交方法相比有以下几个特点： 1、重组频率高并可能有几个亲株同时进行杂交； 2、可以进行种间甚至属间杂交并形成稳定的重组体，但重组 的频率比较低； 3、被灭活的原生质体进行融合后，仍可能活的重组体； 4、原生质体的形成与再生本身就可作为链霉菌的一种育种方 法。;4、基因工程技术改良菌种;（1）DNA重组过程;（2）重组DNA技术在微生物药物菌种改良研究中的应用;C. 构建能产生半合成抗生素中间体的基因工程菌 许多半合成抗生素的中间体是由一些天然产物经过化 学修饰获得的，但是制备工艺较为复杂。例如半合成头孢 菌素的中间体是头孢菌素C的衍生物7-ACA，或青霉素G 和V的衍生物7-ADOCA。 ;D. 构建产生新化合物的基因工程菌 由于许多微生物次级代谢产物酶系的底物特异性不强，当某种抗生素的生物合成基因克隆至另一结构相似、生物合成途径有关的抗生素产生菌中，可使其产生不同于二亲株产物的具有生物活性的新化合物，即“杂合抗生素”。例如，将放线紫红素的生物合成基因导入紫红链霉菌，产生了新化合物二氢榴菌紫红素；聚酮类化合物（PK）。 E. 引入血红蛋白基因，改善微生物的工业性状 充足的氧气供给是稳定和提高发酵工业生产水平、降低生产成本的关键，传统方法是改良生物反应器及增大通气量。专性好氧菌透明颤菌中发现了血红蛋白（VHb），能促进氧气扩散到细胞末端氧化酶上，使细胞在贫氧状态下也能很好生长。;四、药源微生物及微生物药物的筛选技术;1、菌种保藏的目的;2、菌种保藏的基本原理;有针对性的创造干燥、低温、缺氧的外界条件，是微生物菌种保藏的基本技术。 保藏时，一般利用菌种的休眠体（孢子、芽胞等），创造最有利于休眠状态的环境条件，如低温、干燥、隔绝空气或氧气、缺